中英文名称：5-ROX NHS ester，5-ROX-琥珀酰亚胺酯

化学结构与性质

5-ROX NHS ester是一种荧光染料衍生物，其核心结构为5-羧基-X-罗丹明（5-Carboxy-X-rhodamine，5-ROX），通过琥珀酰亚胺酯（NHS ester）活化羧基。NHS酯基团具有较高反应活性，可在温和条件下（如pH 7-9的缓冲液）与含氨基的分子（如蛋白质、抗体或核酸）发生共价反应，形成稳定的酰胺键。该染料在激发波长550 nm、发射波长575 nm附近呈现橙红色荧光，量子产率较高，光稳定性良好。

荧光特性优势

5-ROX的荧光光谱与常见绿色荧光染料（如FITC）形成互补，可减少信号重叠，适用于多色荧光标记实验。其Stokes位移较大（约25 nm），有效降低背景干扰，提升检测灵敏度。此外，5-ROX对pH变化不敏感，在生理环境（pH 6.5-8.5）中荧光强度稳定，适合长期动态监测。

生物标记应用

在生物医学研究中，5-ROX NHS ester常用于标记抗体、蛋白质或核酸探针，用于流式细胞术、荧光免疫分析或荧光原位杂交（FISH）。例如，标记抗体后可用于细胞表面受体的定量分析；标记核酸探针后可用于基因表达水平的检测。其反应条件温和，标记效率高，对生物分子的活性影响较小。

实验操作要点

使用时需将待标记分子溶于无胺缓冲液（如硼酸盐缓冲液），加入适量5-ROX NHS ester，室温反应1-2小时后通过纯化柱去除未反应染料。需注意控制反应pH，避免过高或过低影响NHS酯活性；同时避免长时间光照，防止染料降解。

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