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普鲁士蓝染色液的三种染色方法及注意事项
发布时间:2020-07-22     作者:axc   分享到:

普鲁士蓝染色液的三种染色方法及注意事项

普鲁士蓝反应(Prussianblue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞或间质内,生成一种不溶解的蓝色化合物即三 价铁的亚铁化物。普鲁士蓝染色液主要用于显示细胞中铁离子,常见于吞噬细胞内,可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广, 可以进行复染。

普鲁士蓝染色液的三种染色方法及注意事项 

普鲁士蓝细胞染色

自备材料:

1、固定液:10%中性福尔马林、4%多聚甲醛等。

2、系列乙醇

普鲁士蓝三种染色种类及制备方法

染色种类

制备方法

石蜡切片染色

1、组织固定于10%中性福尔马林,常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm,常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(见注意事项2),浸染15~30min。
5、蒸馏水充分冲洗2~5min。
6、入核固红染色液,淡染细胞核5~10min。
7、自来水冲洗1~5s。
8、常规脱水透明,中性树胶封固

冰冻切片染色

1、无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗2~3min。
2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,时间可以相应缩短。

细胞染色

1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自来水冲洗2次,每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次,每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,时间可以相应缩短

普鲁士蓝染色注意事项:

1、切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林,经普通福尔马林长期固定后,组织会有损伤。避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。

2、整个操作过程中容器要干净,避免用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因普通水内含铁质。Perls stain 染色时,应根据样本情况调整着色时间。

3、所有切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)

4、冰冻切片和细胞染色,根据具体情况摸索实验条件。

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