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两种常用蛋白纯化的方法(Ni柱亲和层析和离子交换层析)
发布时间:2021-11-03     作者:axc   分享到:

两种常用蛋白纯化的方法(Ni柱亲和层析和离子交换层析)

蛋白纯化技术是生物研究领域的一项重要技术。要研究某一个特殊蛋白质,**就要将这个蛋白从生物体中分离纯化出来。蛋白纯化方法主要是利用不同蛋白质间的相似性与差异,依据蛋白间的相似性可以去除非蛋白物质,再根据蛋白质的差异性将目的蛋白分离出来。在本文中,我们将介绍2种常用的蛋白纯化的方法。

一、Ni柱亲和层析

1、自制的简易柱子,直径约为1cm,长度约为2cm,在柱子的下端加入蒸馏水,并关闭柱子的出口。

2、将琼脂糖凝胶倒入柱子,让填料自然沉降,依次用二到五倍的柱子体积的无菌水、8mol/L的尿素、无菌水洗柱子。

3、缓慢加入5ml的硫酸镍,至柱子的颜色由白色变为蓝色,待蓝绿色收集液体滴下来为止。

4、用二到五倍体积的PBS缓冲液平衡柱子,再将粗蛋白样品进行上样,用梯度浓度50mmol/L70mmol/L150mmol/L250mmol/L咪唑进行过柱,流速约为1ml/min

5、以每个浓度用1.5mlEppendorf收集八管,再用二到五倍体积的无菌水洗柱子,再用二到五倍的50mmol/LEDTA洗柱子,除去NiSO4,待至无色状态

6、用多倍体积的无菌水进行洗柱子,将手机液10%的分离胶进行SDS—PAGE分析。

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 二、离子交换层析

1、将macro prep High-Q强阴离子交换填料混匀,吸取16 ml于小烧杯中,静置待填料沉降至烧杯底部,吸取并弃去上清。

2、在烧杯中加入4倍体积的ddH2O,混匀,静置,沉降后去上清。重复2次以充分洗去保存填料中的乙醇。

3、在空柱中加入柱体积10%的装柱缓冲液,静置除去可能存在于柱壁和柱底部薄膜上的气泡。

4、以1:1v/v)比例在烧杯中加入装柱缓冲液(20 mM sodium phosphate, pH 7.0, 1 M NaCl),混匀。用玻璃棒引流加入至柱中,并用装柱缓冲液填满剩余柱体积。静置30 min

5、待填料均沉降至柱底部后,将适配器以较小的倾斜角度插入至柱中填料顶部。

1)打开柱低端开口,以较大流速10 ml/min泵入装柱缓冲液,压实填料。

2)缓慢降低缓冲液的流速,并将装柱缓冲液更换成结合缓冲液(20 mM sodium phosphate, pH 7.0)。

3)设定蛋白纯化程序,使用15倍柱体积缓冲液线性梯度洗脱目的蛋白。

4)收集流出液,进行SDS-PAGE检测。

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苯胺红标记牛血清白蛋白(BSA)

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牛血清白蛋白(BSA)/槲皮素(QUE)纳米颗粒

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胶体金标记牛血清白蛋白BSA

铕螯合物(CTTAA:Eu)标记牛血清白蛋白抗原

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牛血清白蛋白-三聚氰胺偶联物

牛血清白蛋白修饰金纳米簇

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BSA牛血清白蛋白修饰葡萄糖氧化酶

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牛血清白蛋白修饰近红外荧光纳米金

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IR825-BSA 近红外染料标记牛血清白蛋白

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羟基偶联牛血清白蛋白(OH-BSA)

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(BSA-SH)巯基功能化牛血清白蛋白

生物素-螺旋霉素A

HA-BSA ;透明质酸70K-牛血清白蛋白

生物素-转铁蛋白;Biotin-Transferrin

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温馨提示:西安齐岳生物科技有限公司供应的产品仅用于科研,不能用于人体和其他商业用途axc

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