H2DCFDA (DCFH-DA) 是一种可渗透细胞的，用于检测细胞内活性氧 (ROS) 的探针 (Ex/Em=488/525 nm)，H2DCFDA (DCFH-DA) 别称有以下的叫法：

DCFH-DA 活性氧ROS荧光探针

英文名称:2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate

DCFH-DA，羟基自由基探针，cas4091-99-0

活性氧荧光探针(DCFH-DA)

H2DCFDA(DCFH-DA)

2',7'-二氯荧光素二乙酸酯

2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯

2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate

DCFH-DA 活性氧ROS荧光探针

2',7'-DICHLOROFLUORESCIN DIACETATE, FOR FLUORESCENCE

2-(2,7-Dichloro-3,6-diacetoxy-9H-xanthen-9-yl)benzoic acid

DCFH-DA, ROS 探针

细胞内活性氧检测探针DCFH-DA

H2DCFDA(DCFH-DA)是一种通用的氧化应激指示剂

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧(ROS)荧光探针

DCFH-DA激发波长

DCFH-DA分子量

DCFH-DA活性氧检测原理和步骤

活性氧荧光探针(DCFH-DA)，H2DCFDA，ROS荧光探针

2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯，2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，4091-99-0

DCFH-DA使用说明书：

本品以粉末形式提供，可直接溶于无水DMSO配制成1-10mM储存液，常用工作浓度1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
主要参数：
CAS NO：4091-99-0
分子式：C24H16Cl2O7
分子量：487.29
纯度：≥97%
外观：白色-带黄色光泽的白色粉末
溶解性：溶于DMSO（25mg/ml）、DMF（25mg/ml）、无水乙醇（25mg/ml）
结构式：

保存：-20oC避光干燥保存，-少2年。

注意事项：
1．有机溶剂如DMSO储存液需分装成单次用量后，-20oC避光保存，避免反复冻融。
2．为了您的和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：
以下步骤是来源于大量文献总结的简易操作流程，仅作参考。用户需根据特定的应用和敏感性来做调整。
1．将低温保存的冻干粉取出回-室温，低速离心使粉末落到瓶底。之后加入适量无水DMSO或其他有机溶剂配制成1-10mM储存液。未用完的DMSO储存液需分装并避光冻存在-20℃，避免反复冻融。
2．于正式实验前，用生理盐缓冲液（比如：PBS，HBSS，HEPES）稀释到工作浓度1-10μM。需根据具体应用来调整合适的工作浓度。
3．吸走培养液，加入步骤2）配制的染色工作液到细胞内，室温或30℃孵育5~60min。
4．吸走染色工作液，用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍。重新加入预热的生理缓冲液或细胞培养液，在适宜温度内孵育。对于二乙酸酯衍生物，需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解，从而让染料对氧化应激产生反应。佳的复原时间范围很广，由于某些细胞类型通常显示**低水平的酯酶活性。
5．将细胞暴露于实验刺激物之前，先测定加载细胞的背景荧光强度。
6．根据以下情况评估阴性对照（Negative control），
①绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。
②对于流式分析，查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关，由于处理或有毒反应引起的。
③对包含和不包含刺激物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物进行荧光检测。在不含细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随着时间荧光的逐渐增加可能与瞬间水解、空气氧化、和/或光诱导氧化有关。
④检查培养在生长培养液或简单缓冲液内的未处理加载细胞（对照）的荧光。在健康细胞内，细胞内酶和/或抗氧化剂会清除这些氧自由基。经过染料加载复原时间后，健康细胞应该表现出低水平的荧光信号，且在整个实验期间相对稳定。然而，逐渐增加（由于自氧化）或降低（由于细胞内染料丧失或光淬灭）也有可能观察到。在不含任何刺激物或诱导剂的体系内，健康和未处理细胞突然发现强荧光，表明细胞发生死亡或一些其他的氧化事件。
7．建立阳性对照，可能用以下方法刺激氧化活性：
①促进剂（PMA，工作浓度100pM~10μM）
② H2O2或TBHP（终浓度~100μM）（根据细胞本身对其的灵敏度和反应性来提高或降低浓度）
8．确保刺激**或化合物不会引起染料荧光淬灭。检查化合物的吸收光谱，确定化合物的吸收峰不会与氧化后染料的大激发或发射光谱发生重叠。

西安齐岳生物提供一部分荧光探针

在紫外-可见-近红外区有特征荧光，并且其 荧光性质（激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等）可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。

发光探针：

小编zhn2021.11.11