介绍四种量子点标记抗体方法
具体为一种量子点标记免疫球蛋白的方法,包括清洗量子点、活化、二次清洗量子点、清洗免疫球蛋白、偶联和分离步骤。利用水溶性量子点的结构特征和EDC活化羧基的反应特点,以及缩合反应的反应特点,通过优化各个步骤的条件,使量子点表面的羧基得到充分的活化并处于合适的标记环境中;通过优化偶联步骤的条件,使量子点通过缩合反应均能结合到免疫球蛋白的表面,
量子点的标记方法量子点可以与特定抗体或小分子结合,在不改变其化学特性的情况下,受到光源激发后可发出特定波长的荧光,通常有以下几种方法:静电吸引法、常规交联剂连接法及生物素-亲和素法等 。
(一)静电吸引法正电荷氢核遇到另一个电负性强的原子时,产生静电吸引。巯基乙酸修饰的量子点表面带负电,与带正电的蛋白质表面区域可通过静电吸引连接起来,而不需要其他试剂。对于带中性电荷的蛋白质,可以通过改造蛋白质在其末端构建带正电荷的结构,使其能静电吸附于量子点表面。另外,通过对量子点表面修饰使其带负电荷后,除了上述的直接静电吸引靶标物质外,还可以静电吸附连接上亲和素,然后依靠生物素-亲和素的高特异性结合,间接将量子点连接到蛋白质分子上。
(二)常规交联剂连接法交联剂是一类小分子化合物,相对分子质量一般在200~600u,具有两个或者更多的针对特殊基团(如氨基、巯基等)的反应性末端,可以和两个或者更多的分子偶联从而使这些分子结合在一起。
(三)生物素-亲和素法
生物素-亲和素系统(biotin-avidinsystem,BAS)是由于它具有生物素与亲和素之间的高度亲和力及多级放大效应,并与荧光素、酶、同位素等免疫标记技术有机地结合起来,使各种示踪免疫分析的特异性和灵敏度进一步提高。
(四)其他标记方法
(五)利用异源双功能交联剂琥珀酰亚胺-4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸盐把量子点与抗体或配体的巯基通过缩合反应偶联到一起,用于毛细血管电泳法测定人IgM,效果良好。量子点标记后,通常要分析鉴定标记物的质量,通常采用的方法有光谱分析和琼脂糖电泳法。
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