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DAF-FM DA(新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针)的使用方法
发布时间:2021-11-23     作者:zhn   分享到:

DAF-FM DA(新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针)的使用方法使用方法

一、储存液制备

2.1   储存液制备

取低温保存的冻干粉置于室温回温至少20min,低速离心后,加入适量体积的无水DMSO配制成一定浓度的储存液。比如,往1mg DAF-FM DAMw496.42)加入402.88μl DMSO,充分溶解后配制成5mM储存液。

2.2   储存液保存

为了延长储存液的保存时间,需根据单次用量分装避光冻存,以最小化反复冻融次数。分装冻存的溶液至少稳定保存6个月。

2.3   工作液制备

于正式实验前,用合适的生理缓冲液或新鲜培养基取适量储存液稀释到工作浓度。工作液需现配现用,多余的工作液需丢弃。建议起始工作浓度范围是1-10μM

QQ截图20211123101727.png

二、操作步骤

【注意】:以下操作步骤仅做参考。**的加载浓度、时间和温度需根据经验来调整。总的来说,以能达到检测需求的**浓度**。通过降低加载温度能减缓亚细胞区室化现象。

2.1 细胞悬液或玻片上准备活细胞;

2.2 用适当缓冲液或新鲜培养基(不含血清和酚红)稀释DMSO储存液。建议起始工作浓度范围是1-10μM

2.3 用稀释好的DAF-FM DA工作液孵育细胞20~60min,孵育温度为4~37℃。贴壁细胞不需消化后再加载。

2.4 PBS, pH 7.4充分清洗细胞直至去除多余探针。更换新鲜缓冲液或培养基再孵育15~30min,使得细胞内酯酶能将探针充分去酯化。

2.5 激发和发射波长分别是495515nm。因这些波长与荧光素(fluorescein)非常相似,因此,适用于荧光素(fluorescein)或FITC的检测系统都行。

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名称

规格        

Carboxy-PTIO一氧化氮(NO)清除剂

10mg

DAF-FM DA (5mM in DMSO)一氧化氮(NO)荧光探针

100T

DAF-2 DA一氧化氮(NO)荧光探针

100μg

Sodium Nitroprusside (SNP)硝普酸钠

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Sodium Nitroprusside Dihydrate硝普酸钠二水合物

10g

S-Nitrosoglutathione (GSNO)亚硝基谷胱甘肽

10mg

Hemoglobin from Bovine Blood牛血红蛋白

1g

关键词:

cas254109-22-3DAF-FM DA ,一种NO荧光探针

DAF-FM DA

DAF-FM 双乙酸盐

二氨基荧光素-FM 二乙酸酯

4-Amino-5-(N-methylamin)-3,6-bis(acetyloxy)

4-Amino-5-(N-methylamino)-3,6-bis(acetyloxy)-2,7-difluoro-spiro[isobenzofuran-1(3H),9-[9H]xanthen]-3-one;DAF-FMDAsolution

DAF-FMDA(cellpermeable)

-[9H]xanthen]-3-one

4-Amino-5-(N-methylamino)-3;7;9

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