DAF-FM DA(新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针)的使用方法使用方法
一、储存液制备
2.1 储存液制备
取低温保存的冻干粉置于室温回温至少20min,低速离心后,加入适量体积的无水DMSO配制成一定浓度的储存液。比如,往1mg DAF-FM DA(Mw:496.42)加入402.88μl DMSO,充分溶解后配制成5mM储存液。
2.2 储存液保存
为了延长储存液的保存时间,需根据单次用量分装避光冻存,以最小化反复冻融次数。分装冻存的溶液至少稳定保存6个月。
2.3 工作液制备
于正式实验前,用合适的生理缓冲液或新鲜培养基取适量储存液稀释到工作浓度。工作液需现配现用,多余的工作液需丢弃。建议起始工作浓度范围是1-10μM。
二、操作步骤
【注意】:以下操作步骤仅做参考。**的加载浓度、时间和温度需根据经验来调整。总的来说,以能达到检测需求的**浓度**。通过降低加载温度能减缓亚细胞区室化现象。
2.1 细胞悬液或玻片上准备活细胞;
2.2 用适当缓冲液或新鲜培养基(不含血清和酚红)稀释DMSO储存液。建议起始工作浓度范围是1-10μM。
2.3 用稀释好的DAF-FM DA工作液孵育细胞20~60min,孵育温度为4~37℃。贴壁细胞不需消化后再加载。
2.4 用PBS, pH 7.4充分清洗细胞直至去除多余探针。更换新鲜缓冲液或培养基再孵育15~30min,使得细胞内酯酶能将探针充分去酯化。
2.5 激发和发射波长分别是495和515nm。因这些波长与荧光素(fluorescein)非常相似,因此,适用于荧光素(fluorescein)或FITC的检测系统都行。
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名称 | 规格 |
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DAF-FM DA (5mM in DMSO)一氧化氮(NO)荧光探针 | 100T |
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关键词:
cas254109-22-3,DAF-FM DA ,一种NO荧光探针
DAF-FM DA
DAF-FM 双乙酸盐
二氨基荧光素-FM 二乙酸酯
4-Amino-5-(N-methylamin)-3′,6′-bis(acetyloxy)
4-Amino-5-(N-methylamino)-3′,6′-bis(acetyloxy)-2′,7′-difluoro-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthen]-3-one;DAF-FMDAsolution
DAF-FMDA(cellpermeable)
-[9H]xanthen]-3-one
4-Amino-5-(N-methylamino)-3′;7′;9′
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小编zhn2021.11.23