udp -鼠李糖是由udp -鼠李糖合成酶合成的,但该反应需要两种辅助因子NAD+和NADPH。本文介绍了一种辅助因子自给自足的udp -鼠李糖再生系统。
从葡萄中克隆了udp -鼠李糖合成酶(VvRHM)基因,并在大肠杆菌中进行了表达和鉴定。
的氨基端地区VvRHM与双功能融合UDP-4-keto-6-deoxy-d-glucose 3, 5-epimerase / UDP-4-keto-rhamnose 4-keto-reductase (NRS / ER)从拟南芥获得融合酶(VvRHM-NRS),这是NADPH-independent和可以转换UDP-glucose UDP-rhamnose NADH自给自足。
VvRHM-NRS的**活性为pH值7.5和30℃。
VvRHM-NRS的表观Km和Vmax分别为88±9 μM和12.7±0.6 nmol/min/mg, NAD+的表观Km和Vmax分别为69±7 μM和11.9±0.5 nmol/min/mg。
利用VvRHM-NRS与甘氨酸max蔗糖合酶(Glycine max蔗糖合酶,GmSUS)结合,建立了以蔗糖、NAD+和UDP为原料合成UDP-鼠李糖的新工艺。
通过优化耦合反应条件,udp -鼠李糖的产量达到0.57 mM。
最后,以拟南芥糖基转移酶(AtUGT78D1)为原料,采用udp -鼠李糖再生体系合成槲皮素。
因此,VvRHM-NRS结合GmSUS为黄酮类等生物活性物质糖基化过程中udp -鼠李糖再生提供了一种绿色化学途径。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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