SOSG证实能用来检测溶液和植物组织中的单线态氧(1O2)。

　　活性氧引起的许多生理损伤都可能归因于单线态氧(1O2)，包括与脱氧鸟苷选择性反应形成8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的核酸修饰。单线态氧的寿命足够长(水中有4.4μs)使其能够充分扩散进入细胞和组织。单线态氧通过在1270nm处具弱化学发光的**特征直接被检测。实验室中通常用三种之一的方法来生成单线态氧：

　　①使用感光染料对二氧(3O2)进行光化学反应来制备;

　　②通过对一种过氧化物或二氧环丁烷进行加热分解制备;

　　③氧气流内通过微波放电来制备。

　　SOSG高度选择性结合单线态氧(1O2)。不像其他的荧光和化学发光的单线态氧检测试剂，SOSG与其他活性氧物质(ROS)，包括羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(·O2–)和一氧化氮(NO)无可见反应【见图1】。

　　A)用荧光光度计(Ex/Em= 488/525nm)测定溶液内的荧光，溶液内含SOSG(1μM)和亚甲基蓝(10μM)溶于100mMpH 7.5 Tris Buffer;单线态氧清除剂叠氮钠(NaN3，1 mM);或50%D2O(重水，能够延长1O2的寿命)。每20s完成一次荧光测定，每次测定间隔30s(如灰条标示)。在这30s的间隔中，样本暴露于激光辐射(630–680 nm，<5 mW)，导致亚甲基蓝光敏生成1O2。

　　B)用荧光光度计(Ex/Em=488/525nm)测定溶液内的荧光，溶液为50mM pH 7 Tris buffer，1mM黄嘌呤，SOSG(1μM)，或含SOSG(1μM)，或含二氢罗丹明123。约20s之后，加入50 mU/mL黄嘌呤氧化酶(XO)。XO催化黄嘌呤的氧化，产生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬间被H2O2降解。

　　荧光特征：

　　SOSG与单线态氧(1O2)反应前，探针最初发弱蓝色荧光，激发峰在372nm和393nm，发射峰在395nm和416nm。当含单线态氧(1O2)，探针发射绿色荧光，光谱特征类似于荧光素(**激发/发射波长约504/525nm)。

　　线性化关系：

　　SOSG的荧光产物在某些溶液中随着时间被降解，且在不含单线态氧的碱性pH溶液中，SOSG会发荧光。不过，当进行适当的操作，绿色荧光信号的强度与单线态氧(1O2)含量相关，且不会受其他ROS的明显干扰。

　　使用方法：

　　1.SOSG储存液制备：收到货按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇来制备储存液，每100μg粉末加入33μL甲醇制备~5mM储存液。正式实验前制备工作液，不能用完的工作液需丢弃，不可保存后再用。

　　2.溶液检测：SOSG不具细胞膜渗透性，设计用来检测溶液环境内的单线态氧。**的稀释缓冲液和工作浓度需根据经验来调整。建议起始工作浓度为1-10μM。

　　保存：-20℃避光干燥保存，**期至少6个月

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