荧光标记多糖衍生物的研究进展
糖具有抗**、提高免疫力等多种生物学活性,是国内外研究的重要**来源.由于多糖没有光吸收的基团,无法直接通过荧光分光光度计等设备检测,因而将多糖进行荧光标记成为检测多糖的重要方法.荧光标记技术分析多糖能够具有较高的灵敏度和选择性,其中异硫氰酸荧光素(FITC)在生化研究中应用较为广泛.目前关于FITC标记多糖的研究颇为丰富,本文对相关研究进展进行了综述.
1.应用
荧光标记的葡聚糖和其他多糖的衍生物，主要用于细胞和组织的渗透性和传导研究。荧光检测的另一个好处是，提供健康组织对应病变组织的渗透性定量数据。配合萤光显微镜检查实时同步进行。该技术具有高灵敏度，即使组织液中样本浓度低至1μg/ml，仍可检测出。其他应用领域还包括**传递和微循环研究。荧光多糖衍生物也可以作为分子标志物，用于科研用试剂盒。经羧甲基(CM)或二乙基氨基乙(DEAE)修饰的荧光多糖，可用于研究电荷对渗透性的影响。赖氨酸修饰的衍生物为生物结合和固定提供了工具，可用于细胞和与之类似的组织保存。
2.微血管流量和肾小球滤过研究：
使用TdB的150KDa TRITC标记葡聚糖（红色，用于微血管流量）和4KDa FITC标记葡聚糖（绿色，用于肾小球滤过），可以观测活体大鼠肾脏的微循环血流量和肾小球透过。视频开始部分展示的是位于周遭小管中间和交叉部位的肾小球（橙色），细胞内的细胞核呈青色。先缓慢注入分子量大的150 kDa TRITC标记葡聚糖，荧光强度随着该物质在血流中扩散均匀分布逐渐变强继而出现峰值。平衡后，注入分子量较小的4kDa FITC标记葡聚糖，快速通过肾小球滤过膜的屏障，沿着围绕肾小球近端的小管移动。
3.产品组合：
ATTO(TM)标记产品：
FITC标记产品：FITC衍生物已用于多种生物应用超过40年。TdB生产平均分子量 4 kDa到2000 kDa的宽谱FITC-多糖衍生物产品 (490 nm/520 nm)。产品线包括葡聚糖、聚蔗糖、菊粉和其它多糖衍生物。
TRITC标记产品：TRITC衍生物 (550 nm/572 nm)包括了葡聚糖、透明质酸和聚蔗糖的衍生物。includes derivatives of dextran, hyaluronic acid and polysucrose. TdB生产分子量 4 kDa到2000 kDa 的TRITC-衍生物。与FITC相比，TRITC衍生物 pH依赖性较小。
4.荧光基团
产品线由超过30种不同产品构成，其中21种是带荧光标记的 。提供多种不同荧光基团标记的葡聚糖和其它多糖衍生物。其中包括为人熟识的FITC标记（493nm/518nm）和TRITC标记（550nm/572 nm），其用于渗透率研究的历史已经超过40年。产品目录中还包括ATTO™-染料ATTO488标记 (502 nm/524 nm) 和ATTO647N标记 (46 nm/664 nm), 适合单分子检测。还提供特有的红移Antonia Red™标记 (583 nm/602 nm), 带有明亮的荧光，优越的化学和光稳定性，并且对pH没有依赖性。
5.质量
所有TdB提供的多糖衍生物都具有低的聚合分散度（PD）,意味着Mw/Mn之比接近于1。对于渗透性研究而言尤为重要，较低的聚合分散度使结果更为可靠，重现性更好。TdB荧光标记葡聚糖衍生物在聚合分散性方面优于竞争对手，详参“Multiple factors influence glomerular albumin permeability in rats.” RM Sandoval et al., J Am Soc Nephrol, 2012 Mar, 23(3)447-57。
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