抗-PEG琼脂糖亲和纯化mPEG-BSA的方法

（1）9B5 抗-聚乙二醇琼脂糖(3ml)和150mM氯化钠,10mM磷酸钠,0.1%叠氮钠pH7.2(磷酸缓冲溶液PBS)在内径1cm的柱子内混合均匀直至平衡。

（2）1.0毫升含有0.125毫克90%纯的20kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白和0.5毫克人肌红蛋白混合物在磷酸缓冲溶液PBS中加入柱子中。

（3）柱子用每次2毫升PBS冲洗，共4次。

（4）用每次1毫升含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的50%磷酸缓冲液洗脱，共9次。

（5）组分使用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定在12.5% Laemmli 迷你凝胶上跑胶分析。

结果

如图所示,20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白结合9B5抗-聚乙二醇琼脂糖,对照过柱的未结合聚乙二醇的蛋白质，包括牛血清白蛋白和人肌红蛋白。纯20kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的缓冲溶液进行洗脱。

图1.考马斯蓝染色SDS-PAGE凝胶电泳显示1道为柱载，经9B5抗-聚乙二醇亲和纯化过的20kda的使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的缓冲溶液进行洗脱。2-6道，为过流部分和洗涤部分。7-9道，为洗脱部分。

注意事项

（1）在与抗-聚乙二醇琼脂糖进行结合前，应确保样品不含未结合聚乙二醇。

（2）聚乙二醇集合蛋白质可以使用25%乙二醇而无需聚乙二醇8000进行洗脱，但需要用到更多的缓冲溶液。乙二醇随后很容易通过透析除去。

（3）使用含25%乙二醇的磷酸缓冲液（约20倍柱体积）冲洗，然后在PBS中再次平衡，很容易再生9B5抗-聚乙二醇琼脂糖。