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FITC标记凝集素的组织化学染色程序(具体实验步骤)
发布时间:2020-09-18     作者:zhn   分享到:

西安齐岳生物**供应一系列的凝集素;同时提供各种荧光标记修饰偶联的凝集素。提供罗丹明、CY3CY5FITC、生物素Biotin、琼脂糖AgaroseDyLight 488DyLight 594DyLight 649Texas Red标记各种凝集素。

 

紫藤凝集素(WFA, WFL);小麦胚芽凝集素(WGA);长柔毛野豌豆外源凝集素 (VVL, VVA);荆豆凝集素(UEA-I);大豆凝集素(SBA);马铃薯凝集素 (STL, PL);黑接骨木凝集素 (SNA, EBL);蓖麻凝集素I (RCA I, RCA120);豌豆凝集素(PSA);菜豆白细胞凝集素(PHA-L);菜豆红细胞凝集素 (PHA-E);花生凝集素 (PNA);喇叭水仙凝集素(NPLNPA);香蕉凝集素(BanLec);桑橙凝集素 (MPL);双孢蘑菇凝集素(ABL);橙黄网胞盘菌凝集素(AAL);紫荆花菊凝集素(BPL);刀豆蛋白A (Con A);曼陀罗凝集素 (DSL);双花扁豆凝集素(DBA);雪花莲凝集素 (GNL);西非单叶豆凝集素 I (GSL I, BSL I);朱顶红凝集素 (HHL, AL);木菠萝凝集素;小扁豆凝集素 (LCA);;番茄凝集素 (LEL, TL);怀槐凝集素I (MAL I);怀槐凝集素II (MAL II)

 

FITC标记凝集素的组织化学染色程序

1.组织切片经脱蜡处理,若是Bouin液固定的组织,用70%乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后,再用蒸馏水漂洗;

2PBS漂洗(1%牛血清白蛋白)2次,每次5分钟;

3.加入FITC-凝集素(PBS适当稀释),置湿盒内孵育,室温1小时;

4PBS漂洗3次,每次5分钟;

5.水溶性封片剂封片,荧光显微镜观察。

6.结果 FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合,从而显示糖基的位置,可用于检测组织细胞中的糖成分,阳性部位呈黄绿色荧光。

7.注意事项

(1)固定液:以Bouin固定液为佳,也可用70%乙醇固定;

(2)与其他组织化学方法一样,染色过程中,应始终保持一定湿度,使切片保持湿润状态;

(3)需经预实验确定FITC-凝集素的工作浓度;

(4)凝集素的活性部位需重金属离子维持,故可用TBS作为缓冲液,加微量的金属(CaCl2MgCl2MnCl210mmol/L),可增强凝集素的结合能力。

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