链霉亲和素 - 生物素结合探针Biotin-Avidin用于荧光检测
生物素与链霉亲和素的结合是目前自然界中已知的比较强的非共价相互作用,正因为如此,该体系引起了各个领域研究人员的广泛关注.生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世,BAS很快被广泛应用于医学各领域。近年大量研究证实,生物素—亲和素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。
靶标激活的化学探针(target-activated chemical probes)是基础生物学研究和医学诊断中监测酶活性和反应性小分子的重要工具。其中基于荧光开启机制(turn-on)的探针可以分为两类:基于染料的荧光探针(通过FRET, PET, AIE等方式开启荧光)和caged-luciferin。
而在这篇文章中,作者发展了一种新型的turn-on化学探针,其中荧光开启是基于链霉亲和素-生物素结合(简称CBP)。CBP的原理是基于生物素与链霉亲和素具有高的亲和力(Kd = 10-14M),而在生物素的N-1氮上进行化学修饰形成caged-biotin能**降低亲和力(Kd=10-5 M),因此在没有待测物的情况下,细胞上的CBP表面将不能与荧光团修饰的链霉抗生物素结合。 而待测物的存在会触发生物素decage,荧光团修饰的链霉抗生物素将结合到生物素探针上。 因为在一个链霉亲和素分子上有多个荧光团,因此可以**地放大输出信号。 同时,也可以根据实际情况在链霉亲和素上结合不同的荧光团,如Cy5,Cy3或Alexa488。与常规探针相比,CBP具有几个优点,如背景低,信号可以数倍扩增,染料的选择范围宽。在这篇文章中,作者将该方法成功应用于巨噬细胞表面分泌过氧亚硝酸盐(ONOO)的成像。这种CBP探针的设计理念不仅可以用于荧光检测,而且还可以应用在各种其他检测模式下,如电化学和酶放大发光检测。
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