抗体偶联**（ADC）是一类新型的化学药物，其包含单克隆抗体（mAb），该单克隆抗体可选择性结合与与细胞药物性小分子药物载荷相关的药物相关抗原。使用可裂解的酶接头将药物小分子药物载荷附着于抗体。为了确定高度**特异性的mAb，功效是抗****以及在循环中稳定但允许快速裂解以在ADC被细胞吸收后释放细胞杀伤性**的连接物，科学家已经付出了很多努力。已经研究了30多个靶点，并且在临床开发的各个阶段，现在有20多个ADC药物，包括Trastuzumab-DM1（Roche），SGN-35（Seattle Genetics），HuN901-DM1（ImmunoGen），CR011-vcMMAE（Celidex Therapeutics） ），SAR3419（Sanofi-Aventis），CMC-544（Pfizer），和BIIB015（Biogen Idec）等等。

ADC药代动力学方法的评估

ADC是一种异质混合物，包含具有不同****载荷的单克隆抗体混合物。由于这种异质性，配体结合测定（LBA）通常用于ADC生物学分析。分析方法使用了多种平台，包括比色酶联免疫吸附测定，光测定和基于电化学发光的蛋白分析仪。总抗体测定法可用于定量测定结合或不结合**的总抗体。靶向**抗原，抗独特型mAb，抗人免疫球蛋白（IgG）（Fab'），并且抗人IgG（Fc）抗体可用作捕获试剂。然后将抗人IgG（Fab'）使用辣根过氧化物酶（HRP）或抗人IgG（Fc）-HRP或具有链霉亲和素-HRP的生物素化抗人抗体用于检测（见下图1）。

为了消除非特异性结合，猴吸附抗人IgG抗体通常用于非人灵长类动物研究。取决于接头的类型，**结合的位置可位于（Fab'）或载体抗体的铰链区上。**结合的化学计量可能会影响ADC捕获或检测试剂的结合，并显着影响测定性能。而且，即使结合位点没有被直接阻断，某些测定形式对**负荷也很敏感。据报道，不同的测定形式会产生不同的药代动力学（PK），并显着影响关键PK参数的计算，例如清除率和**暴露。似乎大多数测定形式对**负荷非常敏感。

对于缀合的抗体LBA，将抗细胞*性**抗体用作捕捉剂或检测剂，并与上文概述的捕捉剂和检测剂配对，以测量缀合至少一种**的抗体（参见下图2）。

结合抗体测定法的优点在于它们能够量化循环中ADCs可能造成的**逐步损失。但是，使用抗**抗体进行检测时应格外小心，因为用于检测的ADC标准材料相比，ADC的体内载药量可能会发生变化。

ADC的成功设计是在循环中高**连接物的稳定性与**的**内细胞*性**释放的结合。循环中从载体抗体中非特异性释放**仍然是决定ADC半衰期的关键因素。为了测量已从载体抗体释放的**部分（即游离**），可以将竞争性LBA包被用于捕获的抗药抗体和恒定浓度的HRP-**一起用作报告基因（参见下图3）。

因为从ADC释放的游离**的清除速度比ADC自身的清除速度快得多，所以可能无法检测到游离**。为了解决这个问题，可以测量与ADC结合的剩余**。通过使用组织蛋白酶B消化释放先前与载体抗体结合的**，然后通过竞争性LBA分析或LC-MS定量游离**来实现此测量。

理想情况下，应在ADC开发和表征的早期阶段开发用于非临床PK生物学分析的测定方法。与平均DAR标准相比，可以通过测定富集或纯化的**抗体比率（DAR）分数的回收率来进行分析评估，以确保不同的分析形式均等地回收**。如果无法进行此分析，则对于生物分析方法的设计，ADC的作用机理，靶向的**抗原，接头的类型，**抗体比率，细胞*性**等的详细信息是必需的。除了LBA方法外，亲水相互作用色谱（HILIC），HPLC和LC-MS还用于定量ADC。