荧光染料是指吸收紫外线或可见光后发射波长较长的可见光的物质,大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。其用途广泛,医学上可用于进行基因检测、分类与识别,尤其在单分子技术中。荧光染料也起到了重要作用由于其高灵敏度、操作方便等优点荧光染料作为标记物已广泛应用于荧光免疫、荧光探针、细胞染色等多个方面。很多单分子技术,如荧光共振能量转移、双光子融合技术等,运用染料分子来标记待测物质,测得其荧光光谱从而阐述DNA转录、RNA聚合、动力蛋白和蛋白质折叠机理。
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一、FITC的特性
异硫氰酸荧光素(FITC)呈黄色、橙黄色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定,在室温下能保存两年以上,在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。吸收光谱为490~495nm,发射光谱为520~530nm,呈现黄绿色荧光,分子量为398.4.
在碱性条件下(pH8.5以上),FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键,成为标记荧光免疫球蛋白,即荧光抗体。一个Ig分子上能标记15~20个FITC分子。
FITC有两种异构体:
异构体 I, 即 5-异硫氰酸荧光素 或 5-FITC
异构体 II, 即 6-异硫氰酸荧光素 或 6-FITC
异硫氰酸荧光素通常是由其中一种异构体或者有时是两种异构体的混合物构成(混合物的CAS编号为27072-45-3)。早在1942年,FITC首次用于抗体标记。[1]
由于异硫氰酸酯基团的存在以及其高荧光性,FITC常用于蛋白质或多糖等多种底物的标记试剂。异硫氰酸酯在温和条件下与亲核试剂,例如胺,极易反应。
图1. FITC异构体1的结构式。FITC异构体1 (5-异硫氰酸荧光素) 在5位上含异硫氰酸酯基团。
光谱性质:
FITC在λ= 495 nm处有激发波长,在λ = 519 nm处有发射波长 (参见图2) [2]。.该化合物是黄色的,而发射光则是绿色的。FITC两种异构体的激发和发射波长的差别是很小的。FITC标记的功能性生物聚合物,如FITC标记葡聚糖,具有与母体分子相似的激发和发射特性,使FITC成为荧光标记的理想载体。
图 2. FITC异构体I的激发(橙色) 和发射(蓝色)光谱。在495 nm处有大激发波长,在 519 nm处有大发射波长。
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以上来自小编zhn2020.10.29
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