SMCC交联剂偶联载体蛋白KLH和多肽过程

蛋白质交联剂是一类小分子化合物，具有2个或者更多的针对特殊基团（-NH2、-COOH、-HS等）的反应性末端，可以和2个或者更多的分子分别偶联，从而使这些分子结合在一起，然后形成共轭蛋白。

产品名称：SMCC

简介：SMCC crosslinker (Succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a heterobi-functional protein crosslinker with a maleimide group that is sulfhydryl (thiol; -SH) reactive and a NHS ester group that is amine reactive. The SMCC crosslinking reagent is permeable across the lipid bilayer of the cell membrane. The 9 atom spacer arm of SMCC is not cleavable.

Molecular Weight: 334.3

CAS #: 64987-85-5

Spacer Length: 8.3 Å

Alternative Names: 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylic acid N-hydroxysuccinimide ester;

产品名称：Sulfo-SMCC

Sulfo-SMCC crosslinker (Sulfosuccinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a water soluble, heterobifunctional crosslinker. Sulfo-SMCC crosslinking reagent has an 8.3 angstrom non-cleavable spacer arm and its maleimide group reacts with sulfhydryls (thiols), while the Sulfo-NHS ester is reactive toward primary amines. Sulfo-SMCC can be used to pro-duce antibody-protein crosslinked conjugates or efficiently label cell surface proteins.

Molecular Weight: 436.4

CAS #: 92921-24-9

Spacer Length: 8.3 Å

SMCC是一类含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯和马来酰亚胺的双功能偶联剂.可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。该交联试剂可渗透到细胞膜的脂质双层中，NHS活性酯与伯胺在PH7-9的环境形成酰胺键。马来酰胺与巯基在PH6.5-7.5的环境下形成稳定的硫醚键。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（与氨基的反应）个竞争反应。马来酰胺比NHS稳定，但是在PH大于7.5时，马来酰胺会慢慢水解，失去与巯基反应的特异性。因而，在使用SMCC时通常是在PH7.2-7.5的环境下进行，并且先让NHS发生反应。

SMCC结构里的环己烷环可以降低马来酰胺的水解速率。这使得蛋白质在用SMCC修饰之后可以冻干存放一段时间。很多蛋白质都选用该试剂来进行马来酰亚胺修饰。

KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血蓝蛋白，是在某些软体动物、节肢动物(蜘蛛和甲壳虫)的血淋巴中发现的一种游离的蓝色呼吸色素。血蓝蛋白含两个直接连接多肽链的铜离子，与含铁的血红蛋白类似，它易于氧结合，也易与氧解离，是已知的惟一可与氧可逆结合的铜蛋白，氧化时呈青绿色，还原时呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是常被选用的载体蛋白。

用SMCC来制备抗体-酶或者半抗原作载体的蛋白质，经常采用两步合成法。步骤一，含有氨基的蛋白质与几倍的偶联剂反应，反应结束后通过脱盐柱或者透析的方法除掉没有反应完的SMCC。然后，再与含有巯基的蛋白质反应。在实际操作中要注意的是，SMCC怕潮湿，存放时要和干燥剂一起存放。并且使用中从冰箱拿出来时要先在室外放置一段时间平衡温度，以免立刻开启，空气中水分遇冷凝结，破坏SMCC 结构。

1、 将 20 mg SMCC（这是联接40条多肽的量）溶于2 ml DMF。

2、 将0.8 ml KLH加入到25 ml圆底烧瓶中，补加1×PBS(pH 7.2)使蛋白终浓度为 15 mg/ml。

3、 将溶解好的SMCC溶液缓慢滴加到120 mg KLH 蛋白体系中，室温搅拌反应1h。

4、 用1 L 1×PBS (PH 7.4) 溶液于4℃下透析 6 小时，除去游离的SMCC。

5、 将透析后的KLH蛋白倒入50 ml离心管中，通过离心管的刻度确定其体积，根据反应前加入的KLH蛋白的量来计算透析后蛋白的浓度，然后根据其浓度将2.5 mg KLH-SMCC溶液转移到5 ml离心管中。
例如：反应前加入KLH蛋白的量为120 mg，透析后的KLH蛋白体积为20 ml，那么透析后的KLH蛋白浓                                                      μl KLH-SMCC溶液转移到5 ml离心管中。

6、 将 3.0 mg 多肽用 0.6 ml 1×PBS (pH 7.2) 溶液溶解。
注意：这里多称量出0.5 mg多肽是用来做ELISA检测的，取出100 μl即可。检测多肽随交联好的抗原一起寄出，浓度为5 mg/ml。

7、 用Ellman试剂检测多肽中的巯基：在96孔板中加入100 μl Ellman试剂储备液，再加入10μl多肽溶液，用Nano分光光度计在λ=412 nm下测其紫外吸收值，如果OD值>0.15做 下一步；OD值<0.15并>0.05补加多肽，直至达到要求；OD值<0.05返回多肽合成步骤重新质控。
Ellman试剂是用来检测游离巯基的，如果检测液显黄色说明多肽的Cys的巯基大部分以游离态存在；如果检测液不显黄色则说明多肽Cys中的巯基已经被氧化形成二聚体或多聚体。

8、 将多肽液滴加到KLH-SMCC管中，室温下用垂直混匀器混匀反应4小时。

9、 用Ellman试剂检测多肽中的巯基：在96孔板中加入100 μl Ellman试剂储备液，再加入10 μl 教练后的多肽溶液，用Nano分光光度计在λ=412 nm下测定紫外吸收值。OD值<0.03说明多肽和KLH蛋白交联率已达到80%以上；OD值>0.03则再补加SMCC活化好的KLH蛋白继续交联。如果Ellman试剂显黄色说明多肽与KLH蛋白偶联不完全；如果Ellman试剂不显黄色则说明多肽已经全部与KLH蛋白偶联。

西安齐岳生物科技有限公司是西北一家**经营进口生化科研试剂的公司，产品服务于纳米靶向试剂、**传递系统、点击化学等领域。西安齐岳生物科技有限公司可以提供一系列的蛋白交联剂，包含有同端双功能交联剂，异端双功能交联剂，氘代交联剂，生物素交联剂及其他种类交联剂等等产品。我们提供的交联剂产品小包装是100毫克，价格便宜，品质较好深受广大科研客户欢迎。

（一））：生物素交联试剂

Biotinylation Reagents生物素化试剂

Sulfo-NHS-Biotin     CAS Number: 119616-38-5

NHS-Biotin          CAS Number: 35013-72-0

Sulfo-NHS-LC-Biotin  CAS Number: 127062-22-0

NHS-LC-Biotin       CAS Number: 72040-63-2

Sulfo-NHS-SS-Biotin  CAS Number: 325143-98-4

NHS-SS-Biotin       CAS Number: 142439-92-7

Biotin Hydrazide      CAS Number: 66640-86-6

Biotin-HPDP         CAS Number: 129179-83-5

Iodoacetyl-LC-Biotin   CAS Number: 93285-75-7

（二）Heterobifunctional Crosslinkers异型双功能交联剂：

SMCC Crosslinker           CAS Number: 64987-85-5

Sulfo-SMCC Crosslinker      CAS Number: 92921-24-9

Sulfo-SANPAH Crosslinker    CAS Number: 102568-43-4

SMPH Crosslinker

PDPH Crosslinker

MBS Crosslinker             CAS Number: 58626-38-3

Sulfo-MBS Crosslinker

SPDP Crosslinker            CAS Number: 68181-17-9

LC-SPDP Crosslinker  

Sulfo-LC-SPDP Crosslinker

SIA Crosslinker              CAS Number: 39028-27-8

SBA Crosslinker             CAS Number: 42014-51-7

SMPB Crosslinker           CAS Number: 79886-55-8

BMPS Crosslinker           CAS Number: 55750-62-4

EMCS Crosslinker           CAS Number: 55750-63-5

GMBS Crosslinker          CAS Number: 80307-12-6

ANB-NOS Crosslinker        CAS Number: 60117-35-3

Homobifunctional Crosslinkers同型双功能交联剂：

BS3 Crosslinker           CAS Number: 82436-77-9

DSS Crosslinker           CAS Number: 68528-80-3

BS2G Crosslinker

DSG Crosslinker          CAS Number: 79642-50-5

DSP Crosslinker           CAS Number: 57757-57-0

DTSSP Crosslinker        CAS Number: 81069-02-5

Sulfo-EGS Crosslinker     CAS Number: 167410-92-6

EGS Crosslinker          CAS Number: 70539-42-3

DST Crosslinker          CAS Number: 62069-75-4

Zero-Length Crosslinkers - EDC-HCl, Sulfo-NHS & NHS：

EDC-HCl               CAS Number: 25952-53-8

Sulfo-NHS              CAS Number: 106627-54-7

Deuterated Crosslinker BS3-d4

Deuterated Crosslinker BS2G-d4

Deuterated Crosslinker DSS-d4

（三）：Protein modification regents （蛋白修饰相关试剂）

Protein Modification Reagents 蛋白质修饰剂：

SATA Protein Modifier

N-Succinimidyl-S-Acetyl-Thioacetate

CAS Number: 76931-93-6

Sulfo-NHS-Acetate

CAS Number: 152305-87-8

Traut's Reagent  

CAS Number: 4781-83-3

HPG

CAS Number: 24645-80-5

Iodoacetic Acid

CAS Number: 64-69-7

BMPA Modifier

CAS Number: 7423-55-4

（四）Immobilization Resins固定化树脂

Immobilization Resins固定化树脂

Amino-Reactive Resin

Sulfhydryl-Reactive Resin

Carbohydrate-Reactive Resin

Carboxyl-Reactive Resin

Immobilized Pepsin  

Immobilized Chymotrypsin

【交联剂的应用】：

细胞膜结构研究

蛋白质结构研究

蛋白质间相互作用研究

生物研究（靶向**）

载体蛋白与半抗原的连接

蛋白质或其他分子的固相化

抗体的标记、标记转移

蛋白质与核酸的连接

蛋白质修饰等 

【选择交联剂应考虑的因素】：

反应特异性

反应指向性

间臂长度性

水溶性

透膜性

一种或两种反应基团

热反应还是光电反应

可否切断

可否碘标

【可与交联剂反应的基团】：

游离氨基（赖氨酸ε或N末端的氨基）

巯基（半胱氨酸）

羧基（天冬氨酸，谷氨酸，末端羧基）

羟基（丝氨酸或苏氨酸）

酮基，醛基，糖链

苯酚衍生物（苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸）

放射性基团: R-N3 

以上来自小编zhn2020.10.30