1.细胞毒性测试

MTT 法（四唑盐比色法）

将细胞接种于 96 孔板中，培养至合适密度（例如，对数生长期细胞）。设置不同 CY2 - 牛血清白蛋白（CY2 - BSA）浓度梯度的实验组，同时设置空白对照组（只含细胞和培养基）和阴性对照组（含未标记的 BSA 和细胞、培养基）。

将 CY2 - BSA 加入实验组孔中，继续培养一段时间（如 24 - 48 小时）。然后向每孔加入 MTT 溶液，继续孵育 3 - 4 小时，使 MTT 被活细胞中的线粒体琥珀酸脱氢酶还原为不溶性的蓝紫色甲臜结晶。弃去上清液，每孔加入 DMSO 溶解甲臜结晶，用酶标仪在 490nm 波长处测量吸光度。

根据吸光度计算细胞存活率（细胞存活率 =(实验组吸光度 - 空白组吸光度)/(阴性对照组吸光度 - 空白组吸光度)×100%）。选择细胞存活率在一定范围内（如 80% 以上）的 CY2 - BSA 浓度，初步确定为安全浓度范围。

Live/Dead 细胞染色法

同样将细胞接种并设置 CY2 - BSA 浓度梯度实验组、空白对照组和阴性对照组。将 CY2 - BSA 加入实验组培养后，用 Live/Dead 细胞染色试剂盒对细胞进行染色。

活细胞被染成绿色，死细胞被染成红色。通过荧光显微镜观察细胞染色情况，统计活细胞和死细胞的比例。确定使细胞死亡率较低的 CY2 - BSA 浓度范围。

2.荧光强度测试

体外实验

准备一系列不同浓度的 CY2 - BSA 溶液，在固定激发波长（CY2 的激发波长一般在 488 - 495nm 左右）下，使用荧光光谱仪测量其荧光发射强度（CY2 的荧光发射波长在 500 - 520nm 左右）。

绘制荧光强度 - 浓度曲线，随着 CY2 - BSA 浓度增加，荧光强度通常会增加，但当浓度过高时，可能会出现荧光自猝灭现象，即荧光强度不再随浓度增加而线性增加，甚至下降。选择荧光强度增加且未出现明显自猝灭的浓度范围，这个范围通常是比较合适的标记浓度范围。

体内实验（以小动物成像为例）

将不同浓度的 CY2 - BSA 通过合适的途径（如静脉注射、腹腔注射等）注入实验动物体内。在注射后的不同时间点，使用体内成像系统在 CY2 的荧光发射波长范围内进行成像。

观察不同浓度下荧光信号在体内的分布和强度变化。选择既能产生足够强的可检测荧光信号，又不会因浓度过高导致非特异性结合和背景信号过强的 CY2 - BSA 浓度。

3.标记效率测试

光谱法结合蛋白定量法

采用不同浓度的 CY2 - BSA 进行标记反应，反应完成后，通过紫外 - 可见分光光度计测量 CY2 的吸收峰（在 488 - 495nm 左右）强度来估算 CY2 的含量，同时使用蛋白定量方法（如考马斯亮蓝法、BCA 法等）确定 BSA 的含量。

根据 CY2 和 BSA 的含量计算标记效率（标记效率 =（实际标记的 CY2 摩尔数 / 理论上可标记的 CY2 摩尔数）×100%）。选择标记效率较高的 CY2 - BSA 浓度作为最佳标记浓度。

4.电泳结合荧光成像法

对不同浓度 CY2 - BSA 标记后的产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS - PAGE）。由于 CY2 带有荧光，通过荧光成像系统观察电泳后的凝胶，比较不同浓度标记产物的条带荧光强度和位置。

标记效率高的 CY2 - BSA 浓度对应的条带荧光强度相对较高且条带位置符合预期（CY2 标记后 BSA 分子量增加），综合判断选择最佳标记浓度。

关于我们:

西安齐岳生物科技经营的产品种类包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记物、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近红外荧光染料，聚苯乙烯微球，上转换纳米发光颗粒，MRI核磁造影产品，荧光蛋白及荧光探针等等。

温馨提示：供应产品仅用于科研，不能用于人体！

相关产品：

PLGA-PEG-cRGD MW:20000,3400
Sulfo-Cy3 NHS ester
PLA-PEG-OH,MW:5000.3400 (PLA,DL型)
NHS
mPEG-MAL,MW:5000
Cy5-PEG-SH,MW:1000
PAMAM-PLA-NH2
PCL-PEG-NHS
BSA-CY5.5
Concanavalin A-FITC
DO3AtBu-N-(2-aminoethyl)ethanamide
Avidin亲和素
PCL-b-PGA
AuNRs-PEG-COOH，长径比为5
Poly-L-lysine-FITC Labeled
5-Carboxytetramethylrhodamine; 5-TAMRA CAS:91809-66-4