DiR标记内脏脂肪来源外泌体

一、染料概述

DiR是一种近红外脂溶性荧光染料，属于碳氢链修饰的Cyanine类染料，激发波长约为748 nm，发射波长约为780 nm，适用于体内外成像。由于其高度亲脂性质，能嵌入外泌体膜，适用于追踪外泌体的分布和转运。

二、标记原理

内脏脂肪来源外泌体（Visceral Adipose Tissue-derived Exosomes）具有典型的脂质双层膜，DiR通过疏水相互作用插入脂膜，形成稳定的荧光标记结构，不影响外泌体功能或结构。

三、实验步骤

1. 外泌体提取：收集脂肪组织来源培养上清，离心法或超滤法富集外泌体；
2. DiR染料溶液制备：使用DMSO溶解DiR后稀释入PBS，控制终浓度一般为1 μM；
3. 标记反应：与外泌体在37℃孵育15–30分钟；
4. 去除游离染料：超速离心或使用Exosome Spin Columns分离；
5. 验证标记效率：通过激光共聚焦、IVIS系统或流式细胞术观察荧光强度。

四、应用价值

体内追踪研究：用于小鼠肝脏、肺、肾等器官靶向研究；

评价组织摄取情况：观察内脏脂肪来源外泌体在靶器官的富集能力；

代谢研究：与肥胖、代谢综合征、胰岛素抵*等关联机制研究。

五、注意事项

使用前过滤染料，避免沉淀；

控制染料浓度，避免自聚集荧光干扰；

存放于避光4℃，短期内使用。