寡核苷酸诱导的定点突变,定制服务
齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
寡核苷酸诱导的定点突变是一种常用的分子生物学技术,该技术的核心是设计并合成一段寡核苷酸引物,这个引物在特定位置上包含了与原始基因序列不同的碱基,即突变碱基。在 PCR 反应中,这个寡核苷酸引物与模板 DNA 退火,然后在 DNA 聚合酶的作用下延伸,从而将突变引入到新合成的 DNA 分子中。
首先,根据要突变的基因序列和突变的位置及类型,精心设计寡核苷酸引物。引物的长度通常在 20 - 30 个碱基左右,除了包含突变碱基外,还需要保证其与模板 DNA 有足够的互补性,以确保退火的特异性和效率。
接下来,进行 PCR 反应。反应体系中包含模板 DNA、寡核苷酸引物、四种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA 聚合酶以及适当的缓冲液。在 PCR 过程中,引物与模板 DNA 结合,DNA 聚合酶以模板为基础,按照引物的序列合成新的 DNA 链,将突变碱基整合到新合成的 DNA 分子中。
PCR 反应结束后,需要对产物进行处理和鉴定。可以通过酶切、连接等方法将突变后的 DNA 片段克隆到合适的载体中,然后进行测序验证,以确保突变的成功引入且没有其他意外的突变发生。
产品:
单gRNA载体应用于移码或片段敲除
双gRNA载体应用于大片段基因敲除
全基因敲除 定制服务
条件性基因敲除 定制服务
基因敲进 定制服务
诱导性基因敲除 定制服务
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。