荠菜中酚类物质与过氧化物酶作用底物的研究-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

荠菜[Capsella bursa-pastoris (L.) Medicus]属于十字花科一年或两年生草本植物，别名护生草、荠荠菜、香善菜、田儿菜、雀雀菜、地米菜等0。荠菜含有荠菜酸、生物碱、黄酮类化合物和多种氨基酸、维生素等成分，具有丰富的营养和很高的药用价值12-3]。但是由于荠菜采摘期和贮藏期短，大大降低了其食用价值。为此，研究荠菜的保鲜、贮藏和加工过程中的衰老机理，对于综合开发利用现有的资源具有重要的意义。

近年来，对荠菜的研究主要局限在保鲜方法及其营养物质成分的提取上，但是从影响荠菜衰老的酚类物质和相关酶类方面研究未曾涉及。相关材料表明，过氧化物酶活性的增加是植物衰老的**特征之一，酚类物质则是过氧化物酶作用的直接底物。前期研究结果表明，在荠菜衰老的过程中，总酚和游离酚类含量下降，同时，POD活性增大，二者呈**正相关。酚类物质与植物组织的衰老和褐变密切相关。本实验荠菜中的酚类物质鉴定和过氧化物酶底物特性，以期为荠菜的贮藏和保鲜加工提供一定理论依据。

方法

方法一：酚类物质的提取

酚类物质的提取方法[13]:用甲醇作为溶剂，将荠菜和甲醇按照1:2(g/mL)的比例进行研磨，得提取液供实验研究。

方法二：酚类物质的紫外-可见光谱扫描

取3mL荠菜酚类物质提取液置于石英比色皿中，在200~500nm紫外区域扫描，基线扫描以甲醇作为标准液。同时用甲醇配制浓度0.1 mmol/L的酚类标样进行光谱扫描，与样品紫外吸收光谱图进行比较114]。

方法三：酚类物质的**液相色谱分析

吸取2.0mL荠菜酚类物质提取液，以0.22 um有机膜过滤备用。色谱条件:色谱柱Agilent ZORBAX SB-Cis(46mm×250mm，5um);流动相用乙腈、水，乙腈体积由5%上升至35%;柱温30℃;流速1 .0mL/min，检测波长为280nm，进样体积为20 uL。

方法四：过氧化物酶液的制备和酶活测定

粗酶液的提取:准确称取荠菜叶片样品0.5g，放入研钵，放少许石英砂，加入pH7.8的瞬散绫作他6mL进行研磨，抽提后于低温400Or/min离心，20min后收集上清液即为POD粗酶液。

方法五：过氧化物酶活性测定

反应体系中依次加入2.0mL 0.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.4)，1mL酚类底物，50uL粗酶液，加入0.1mL 0.75% H:O:溶液，迅速颠倒混匀，于A4oo处测其吸光度，每30s读数1次，计时3~5min。以磷酸缓冲液取代酶液作为空白管，以每分钟在460nm吸光度变化0.001为1个酶活性单位。

方法六：酚类底物种类和浓度对POD活力的影响

按底物种类分别为焦性没食子酸、没食子酸、绿原酸、儿茶酚、表儿茶酚、咖啡酸，底物浓度分别为4、6、8、 10mmol/L添加，然后放在30℃水浴锅内静置10min，取出后冷却于波长460nm测定吸光度。以底物浓度为横坐标，以△Asoo为纵坐标，绘制底物浓度曲线。

结果与分析

试验将多种酚类标准样品进行紫外扫描并与荠菜中酚类物质提取液的紫外吸收光谱进行对照(表1)。结合图1，荠菜酚类提取物的吸收峰形有一个明显的主峰，吸收波长在213nm。其荠菜酚类物质提取物与标样焦性没食子酸的紫外-可见扫描谱图波形和**波长高度一致(图1和表1)。而与儿茶酚、绿原酸和酪氨酸等标样的吸收峰不同(表1)。因此，推断荠菜中的主要酚类物质为焦性没食子酸。

图1荠菜酚类提取物(A)与焦性没食子酸标样(B)紫外吸收扫描图

结论

综合荠菜酚类提取物的紫外扫描和**液相色谱的分析结果得出:荠菜中含有焦性没食子酸、咖啡酸、表儿茶酚3种酚类物质，以焦性没食子酸为主。荠菜中酚类物质的吸收波长是213nm。此外，荠菜酚类提取物的**液相色谱图中保留时间为4.5min处的酚类物质还有待进一步确定。荠菜POD作用底物为绿原酸，酶促反应的底物浓度为8mmo1/L。

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