构建CRISPR KO（基因敲除），技术服务

CRISPR KO（基因敲除）是一种利用 CRISPR/Cas9 技术实现特定基因功能丧失的方法。CRISPR/Cas9 系统由 Cas9 蛋白和向导 RNA（gRNA）组成。gRNA 可以通过碱基互补配对原则特异性地识别目标基因的 DNA 序列，引导 Cas9 蛋白对该序列进行切割。细胞内的 DNA 损伤修复机制在修复切割位点时，可能会引入插入或缺失突变，从而破坏目标基因的功能，实现基因敲除。

构建 CRISPR KO 通常包括以下步骤：首先，设计针对目标基因的 gRNA。可以通过在线工具或软件，选择目标基因中合适的序列作为 gRNA 的靶标位点，确保其特异性和有效性。然后，将设计好的 gRNA 序列克隆到合适的载体中，通常与表达 Cas9 蛋白的载体一起使用。接下来，将构建好的载体转染到细胞中，可以采用脂质体转染、电穿孔等方法。转染后的细胞经过筛选和鉴定，确定成功敲除目标基因的细胞株。

CRISPR KO 具有许多优点。它操作相对简单、高效，可以快速实现对特定基因的敲除。同时，该技术可以应用于多种细胞类型和生物体，具有广泛的适用性。在生物学研究中，CRISPR KO 可以帮助研究人员确定特定基因的功能，揭示基因在细胞生理过程、疾病发生发展中的作用。

然而，构建 CRISPR KO 也存在一些挑战。例如，可能会出现脱靶效应，即 Cas9 蛋白在非目标位点进行切割，导致意外的基因改变。为了减少脱靶效应，可以优化 gRNA 的设计、提高转染的特异性等。此外，基因敲除可能会引起细胞的补偿机制，影响对基因功能的准确评估。

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

服务类型

哺乳动物细胞基因敲入：用于基础研究、研究肿瘤发生发展机制、药物筛选及评价等。

ESC或iPSC干细胞基因敲入：用于再生医学、疾病建模等研究。

荧光/蛋白标签定点敲入

位点基因敲入

提高KI效率，齐岳生物一直在路上

产品：

单gRNA载体应用于移码或片段敲除

双gRNA载体应用于大片段基因敲除

全基因敲除 定制服务

条件性基因敲除 定制服务

基因敲进 定制服务

诱导性基因敲除 定制服务

动物基因编辑

全基因敲除小鼠

全基因敲除cas9

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。