光疗，包括光热疗法（PTT）和光动力疗法（PDT），依靠化学光敏剂（PSs）吸收近红外光（NIR）的能量，产生大量的热量或单线态氧（1O2），对生物分子造成不可逆的损伤，从而导致**细胞凋亡。光疗以其无创性、**性、时空控制、对健康组织低毒等诸多优点，在****领域备受关注。然而，由于热能分布不均和**乏氧环境的影响，它不能完全消融**细胞，存活下来的**细胞可诱发局部复发或远端转移。通过光疗和化疗的联合，可以将残留的**细胞摧毁，从而阻止**的复发和转移（图1）。

图1. HA修饰共载NIR770/DOX纳米粒子用于**靶向协同诊疗一体化

刺激响应性**载体系统能对诸如pH、ROS、GSH、温度、酶和近红外光等外界刺激因素产生反应，可以介导**在病灶部位特异性释放，从而**的提高**的**效率和降低潜在的毒副作用。

丝素蛋白是天然高分子生物材料，具有优良的生物相容性。一种结合**症成像示踪与靶向**的诊疗一体化纳米鸡尾酒疗法，将具有线粒体靶向功能的ICG类似物（NIR770）和抗****阿霉素（DOX）共载于丝素蛋白纳米粒子中，并利用透明质酸（HA）对其表面进行功能化修饰。

纳米粒释放实验表明，所获得的纳米粒子HNDNPs具有明显的酸性pH、H2O2、GSH、高温和透明质酸酶（HAase）五重刺激响应性。进一步的研究发现，丝素纳米粒子中富含由肽段间氢键维系的β-折叠片层结构和二硫键，这些化学键共同维持丝素纳米粒子的稳定性[2-3]。

氢离子、ROS和高温能破坏维系β-折叠稳定的氢键，GSH能打断丝素粒子内部的二硫键，而HAase则降解粒子表面的HA层。正是由于粒子表面HA层或内部起稳定作用的化学键遭到破坏，致使纳米粒子成为疏松的体系，于是表现出明显的pH/ROS/GSH/高温/HAase刺激响应性（图2）。

图2. 纳米**的多重刺激响应性评价

通过吞噬实验发现，与表面未修饰载DOX的纳米粒子（DNPs）相比较，**细胞对HA表面修饰载DOX的纳米粒子（HDNPs）具有更高的吞噬效率。当在培养基中加入游离HA分子后，细胞对HDNPs的吞噬效率**下降。

NIR770在细胞内释放后，会因为其自身的亲脂性和强正电性而积聚在线粒体周围，同时DOX分子则富集于细胞核内。体外抗**实验数据显示，在NIR照射下，HNDNPs表现出明显的光热、光动力和化疗协同**效果。

随后的小动物活体成像和光声成像的实验数据显示，HNDNPs能特异性富集于**组织中。从**组织冰冻切片的荧光染色图片可以观察到纳米**弥散在整个**组织，验证了HNDNPs具有**的**渗透性能。体内抗**实验结果表明，在NIR照射下实现了**的多模态成像指导下的PTT- PDT和化疗协同**，具有比单一疗法更好的**效果（图3）。

图3.体内抗**效果

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zzj 2021.3.9