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基因定点突变原理,详情介绍
发布时间:2024-12-12     作者:axc   分享到:

基因定点突变原理,详情介绍

基因定点突变原理

目前基因突变主要使用PCR介导的突变引入技术,常见的基因定点突变方法有重叠延伸PCR法和滚轮扩增法,两种方法有利有弊。

(1)重叠延伸PCR 法
常规重叠延伸PCR需设计一对涵盖突变位点的引物进行两轮PCR,其中,带红色点标记的是替换成别的碱基,如正常是C可以换成T等方法,同时,还应设计他们对应的引物,也就是基因两端的,像上图的F和R引物。
**轮PCR由正向外侧引物(F)与突变引物(R_m)合成片段1,由另一突变引物(F_m)与反向外侧引物(R)合成片段2,关键是会出现相同也就是一样的一段,即突变位点那部分;扩增完成后的产物同时为模板进行第二轮的PCR,因为突变位点俩区域可以碱基互补配对而连接起来,这样可以将来源不同的扩增片段重叠拼接起来,如片段1中的某条链和片段2中的某条链含有突变位点的部分配对,然后引物的作用下延伸,后在引物R和F扩增出含突变位点的全长基因。
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该方法的缺陷是操作相对繁琐,两轮PCR扩增和频繁的DNA回收操作会提高原始质粒污染的风险,并且第二轮PCR受影响因素较多,有时反复调整PCR反应条件也不能获得目标基因。

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该方法的缺陷在于7~10 Kb全长质粒的扩增往往不顺利,若不彻底消化原始质粒也容易产生假阳性克隆。同时,若需要完成多位点的定向突变,则需要花费更多的时间精力以及试剂成本。


西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:

(1)过表达质粒构建;

(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)

(3)构建基因截短体质粒;

(4)亚克隆质粒构建;

(5)通过慢病毒介导的基因过表达;

(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除


注意事项:

本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。

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