Cy3-Streptavidin,花菁染料CY3链霉亲和素的合成过程研究
Cy3-Streptavidin是一种将荧光染料Cy3共价标记到链霉亲和素(Streptavidin)蛋白上的复合物,用于生物标记、分子识别及高灵敏度检测。
合成过程研究:
材料准备
链霉亲和素含有多个赖氨酸残基,表面有自由氨基,适合与Cy3-NHS酯反应。
Cy3染料以NHS酯活性形式购买,保证高反应活性。
偶联反应
在pH 7.5-8.5的缓冲体系(如PBS)中,Cy3-NHS酯与链霉亲和素按照预设摩尔比混合。
反应一般在4℃或室温下,轻柔摇晃数小时,保证充分偶联。
反应期间控制温度和时间,避免蛋白质变性。
标记密度调控
通过调整Cy3与蛋白的摩尔比,获得最佳的标记密度,保证荧光强度同时保持链霉亲和素的生物功能。
纯化过程
使用透析或凝胶过滤色谱(如Sephadex G-25)去除游离的Cy3染料。
纯化后样品保持高纯度,避免背景信号。
质量控制
紫外-可见光谱测定标记效率。
SDS-PAGE电泳检测蛋白完整性和染料结合情况。
荧光光谱确认染料发射性能。
功能性验证
通过生物素结合实验确认标记链霉亲和素的结合活性。
细胞和生物分子标记实验,验证荧光信号与结合能力。
工艺优化
研究不同缓冲体系、pH值、温度对偶联效率和蛋白稳定性的影响。
优化反应条件以限度保持链霉亲和素的活性和染料的荧光性能。
产品名称:Cy3-Streptavidin,花菁染料CY3链霉亲和素
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
齐岳生物供应各种荧光染料,包括CY系列、FITC、Rhodamine、Bodipy系列染料、Coumairn 染料、Dansyl染料、FAM/5-TAMRA、NBD、ICG及IR系列、ATTO系列染料、AMCA、Perylene、碘化物、DIR/DIL/DIO/DID/DAPI细胞膜染料等等,提供各种荧光(CY系列、FITC、香豆素、罗丹明等)荧光染料标记的定制服务
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