文献：Precise and non-invasive circulating tumor cell isolation based on optical force using homologous erythrocyte binding†

文献链接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2021/xx/c9lc00361d

作者：Xuejia Hu‡ ac, Daoming Zhu‡ a, Ming Chen‡ b, Keke Chen a, Hailiang Liu a, Wei Liu *a and Yi Yang

为了验证DSPE结合性能，使用DSPE-PEG-Cy5标记RBC。将RBC与DSPE-PEG-Cy5混合并结合后，洗涤混合物并重新悬浮在PBS缓冲液中，以去除游离的DSPE和荧光染料。在激光照射下，使用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）在显微镜下捕获的标记红细胞的荧光图像；几乎所有的细胞都发出红色荧光，表明质膜和DSPE分子之间存在强而高效的结合。

然后，为了揭示FA与肿瘤细胞之间的联系，将MCF-7细胞分别与标记有DSPE-PEG-FA和DSPE-PEG-Cy5的红细胞混合。与修饰的红细胞孵育一小时后，用FA红细胞培养的MCF-7细胞被许多工程红细胞覆盖，用RBCs-Cy5培养的MCF-7-细胞与红细胞分离，表明红细胞、DSPE-PEG-FA和肿瘤细胞之间存在稳定的连接。分别用Hoechst（肿瘤细胞核）和Cy5（红细胞膜）染料标记的MCF-7和红细胞的CLSM图像。

通过这种无害的化学结合，许多红细胞紧紧地结合在CTC的膜上。在显微镜下计数每个CTC上附着的红细胞的平均数量，统计结果表明，几乎所有的肿瘤细胞都被五个以上的红细胞覆盖，98%的肿瘤细胞被十到二十个红细胞覆盖。

此外，使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测红细胞膜蛋白。48 SDS可以破坏细胞蛋白与其他分子之间的连接，不同的细胞蛋白会在聚丙烯酰胺凝胶中行进不同的距离；因此，使用这种方法分离并揭示了红细胞的蛋白质。蛋白质分析结果如图2e所示，修饰和未修饰的红细胞在膜蛋白中保持不变，表明修饰过程将保持细胞膜的完整性，对红细胞友好。

为了揭示红细胞膜和DSPE的结合性能，捕获了用DSPE-PEG-Cy5修饰的红细胞的CLSM照片；与DSPE结合的红细胞会发出红色荧光。比例尺：20μm。（b）用DSPE-PEG-FA修饰的红细胞培养的MCF-7的亮场图像。比例尺为30μm。（c）用DSPE-PEG-Cy5修饰的红细胞培养的MCF-7的亮场图像。比例尺为30μm。（d）与FA红细胞孵育后单个HCT116细胞的两个荧光图像；细胞核用Hoechst（蓝色）标记，RBC膜用Cy5（红色）标记。比例尺为20μm。（e）修饰前后红细胞的SDS-PAGE蛋白分析。

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