BSA-FITC(荧光素标记牛血清白蛋白)合成制备
中文名称:FITC标记牛血清白蛋白
英文名称:BSA-FITC(Bovine Serum Albumin-Fluorescein)
别名:FITC-BSA、荧光牛血清蛋白
供应商:西安齐岳生物科技有限公司
用途:科研
一、反应原理:
FITC(异硫氰酸荧光素)具有活泼的异硫氰酸基团,可与蛋白质赖氨酸残基的氨基反应,生成稳定的硫脲键,从而将荧光团共价连接至蛋白上。
二、原料准备:
BSA:常用浓度为10 mg/mL,在0.1 M NaHCO₃缓冲液中(pH 8.5)溶解;
FITC:在DMSO或乙醇中新鲜配制(常用浓度为1–10 mg/mL);
缓冲液:0.1 M NaHCO₃或PBS(pH 8.5)
三、合成步骤:
反应配比
按BSA与FITC摩尔比1:3~1:10配制反应体系(根据标记密度需求调整);
在避光条件下缓慢滴加FITC至BSA溶液中,并轻微搅拌。
孵育反应
反应通常在4°C或室温避光下进行4–12小时;
控制pH在8.0–8.5,有利于反应效率,防止蛋白质变性。
纯化处理
反应后需用透析袋(10 kDa)进行48小时透析,更换PBS缓冲液3–4次以去除游离FITC;
也可使用凝胶层析柱(如Sephadex G-25)进行分离。
检测与储存
用UV-VIS分光光度计测定FITC吸收峰(495 nm)与蛋白280 nm吸收比值,计算标记密度(FITC/BSA);
建议冷冻(-20°C)避光保存,加入0.01% NaN₃防止微生物污染。
四、应用与优势:
应用:
细胞摄取实验:用于示踪蛋白质摄取与分布;
免疫组化:作为非特异性对照蛋白;
荧光成像:观察蛋白质运输、血脑屏障通透性等;
载药或纳米材料示踪:例如FITC-BSA纳米粒;
优势:
荧光强度高,绿色可视化清晰;
BSA为天然蛋白,生物相容性优;
标记工艺成熟,重复性强。
关于我们:
西安齐岳生物提供的荧光标记服务支持糖化学、蛋白质、多肽、抗体、核酸及纳米材料等多种生物分子的荧光化修饰。可提供多种荧光探针(如FITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor系列、ICG等),根据应用场景(流式细胞、共聚焦、活体成像等)选择合适波长及标记方式。服务包含标记反应、纯化、标记率评估及质量验证,确保分子活性和信号强度。适用于细胞追踪、分子成像、靶向验证等研究,亦可提供定制荧光强度、pH响应或近红外探针功能化服务。
以上资料由小编zhn提供,仅用于科研
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