DSPE-PEG-NBD在肺靶向纳米脂质体中的示踪功能与成像应用探索

链接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02781-1

作者：谢申霞,韦石,段斯良,黄夏宁,刘爱群,侯晓琼,林宣东,钟丹妮,孙书阳,丁自强,杨小梅,陈晓媛&路晓玲 

摘要：

纳米医学的出现需要新型的运载载体来主动靶向其作用位点。本文展示了肺靶向载药脂质体的研发及其功效、特异性和安全性。我们的研究重点关注糖皮质激素甲基泼尼松龙 (MPS)，这是一种常用于*肺损伤的药物。该类固醇分子被负载于功能化的纳米空间稳定单层脂质体 (NSSL) 中。靶向功能是通过结合表面活性蛋白 A (SPANb) 纳米*体形成的 MPS-NSSLs-SPANb 来实现的。MPS-NSSLs-SPANb 表现出良好的粒径分布、形貌和包封率。动物实验证明了 MPS-NSSLs-SPANb 对肺具有高度特异性。 MPS-NSSLs-SPANb *可降低大鼠支气管肺泡灌洗液中 TNF-α、IL-8 和 TGF-β1 的水平以及肺组织中 NK-κB 的表达，从而减轻肺损伤并提高大鼠存活率。纳米*体功能化的纳米颗粒在*肺损伤方面表现出优于*体功能化的系统。

材料：

1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱 (DSPC)、硝基苯并呋咱 (DSPE-PEG-NBD) 购自 Avanti Polar Lipids, Inc. (阿拉巴马州阿拉巴斯特)。1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-PEG 3400 -NH 2 (DSPE-PEG 3400 -NH 2 ) 购自 Nanocs Inc. (纽约州纽约市)。N-琥珀酰亚胺碘乙酸酯 (SIA 交联剂) 购自 Thermo Scientific (马萨诸塞州沃尔瑟姆)。磷酸盐缓冲液 (PBS, pH 7.4) 和胆固醇 (CHOL) 购自 Sigma-Aldrich (密苏里州圣路易斯)。SP-A *原由上海优龙生物科技有限公司 (中国上海) 合成。 SP-A纳米*体（SPANb）由上海市肺科医院呼吸疾病实验室合成（Gajic等，引文2011）。所有其他化学品和溶剂均为分析纯。所有水相制备均使用Milli-Q H 2 O (18.2 MΩ)。所有化合物均未经进一步纯化使用。

采用pH梯度远程加载法制备甲基泼尼松龙NSSL

将 SPANb 与 MPS–NSSLs 共轭形成 MPS–NSSLs–SPANb

将SPANb与MPS-NSSLs混合，然后在4°C下孵育过夜以进行结合。为了优化结合效率，将SPANb和MPS-NSSL以不同的His标签与碘乙酸盐的摩尔比混合。在XCell SureLock Mini-Cell电泳系统（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）上进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，以确认SPANb与MPS-NSSLs的结合。使用Image J软件（Bethesda，MD）对染色的凝胶进行积分，计算结合效率百分比（Gajic等人，引文2011）。结合后，MPS–NSSLs–SPANb（SPANb 和 MPS-NSSLs 的混合物）通过凝胶过滤纯化，纯化柱为 Superose 12 10/300 柱（GE Healthcare，Chicago，IL），并用 PBS 平衡以去除游离的 SPANb。对于 FITC 标记的 MPS-NSSLs-SPANb（MPS-NSSLs-SPANb-FITC），使用相同的方法，将 SPANb 替换为 FITC 标记的 SPANb（SPANb-FITC）。使用 DSPE-PEG-NBD 替换/混合 MPS，然后使用相同方法制备 MPS-NSSLs-NBD/NSSLs-NBD。

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