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基于DSPE-PEG2000-MAL的肽偶联反应及纯化方法
发布时间:2025-07-03     作者:zyl   分享到:

文献:Dual Functioned Hexapeptide-Coated Lipid-Core Nanomicelles Suppress Toll-Like Receptor-Mediated Inflammatory Responses through Endotoxin Scavenging and Endosomal pH Modulation

作者 :Yuting Ji, Liya Sun, Yuan Liu, Yanhui Li, Tongxuan Li, Jiameng Gong, Xiali Liu, Huiqiang Ma, Jingying Wang, Bing Chen, Shan-Yu Fung, Hong Yang

文献链接:

https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202301230

纳米胶束是通过薄膜水合法制备的。将聚乙二醇化的脂质基单体(DMPE-PEG2000、DPPE-PEG 2000、DSPE-PEG2000,DOPE-PEG2000和DOTAP)(10mg)溶解在氯仿(2mL)中,并在45°C的低压下干燥以形成薄膜。然后在55°C下用PBS(3 mL)重新水合,然后在室温下以120 W的功率进行浴超声波处理5分钟,形成纳米胶束:MDMPE-PEG。MDPPE-PEG、MDSPE-PEG、MDOPE-PEG和MDOTAP。

对于M-P12的制备,将Pep12(CLPFD)溶液(PBS中的2 mL和2 mg mL-1)以1.5:1的摩尔比加入纳米胶束中(Pep12:DSPE-PEG2000-MAL)。

Pep12的巯基和DSPE-PEG2000-MAL的马来酰亚胺基团之间的偶联是通过Michael加成反应在室温下在黑暗中温和搅拌24小时完成的。将所得混合物用PBS(pH 7.4)透析24小时,以去除未偶联的Pep12。

通过分别用Pep13、PepTT和PepSS替换肽Pep12,应用相同的程序制备其他肽修饰的脂质核纳米胶束M-P13、M-TT和M-SS。为了构建P-P12,将由DSPE-PEG2000-MAL制成的胶束核替换为由PLA2000-PEG3400-MAL制备的聚合物核。

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为了制备DiD标记的M-12,在薄膜水合法中加入DiD(38.4µg)以制备纳米胶束。这些负载DiD的纳米胶束用Pep12修饰,然后透析(<3500 Da)24小时,以在进一步实验之前去除多余的DiD。在所有细胞和体内实验之前,所有纳米胶束都经过过滤灭菌(0.22µm,Millipore,Billerica,MA,USA)。

采用薄膜水合法制备Lipo-P12。将大豆卵磷脂(180mg)和胆固醇(60mg)溶解在氯仿中,完全去除溶剂以获得薄膜。将其在PBS(10 mL,pH 7.4)中再水化,并在室温下用探头超声波仪(Scientz,中国宁波)在150 W下超声处理溶液5分钟,以获得脂质体(Lipo)。

将未改性的脂质体与DSPE-PEG2000-Pep12在60°C下孵育2小时,得到Lipo-P12。所有脂质体均通过过滤(0.22µm,Millipore,Billerica,MA,USA)灭菌,在使用前以14000 rpm离心2小时,并在4°C下储存。

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