ATTO 425-TSA 是一款基于 tyramide（酪胺）化学放大（Tyramide Signal Amplification, TSA）技术的荧光探针试剂，结合了高亮度、高光稳定性的 ATTO 425 荧光染料与 tyramide 分子，通过过氧化物酶（通常是辣根过氧化物酶，HRP）催化下的共价标记机制，提高了免疫检测、原位杂交（ISH）、免疫组织化学（IHC）、以及细胞成像等生物实验中的检测灵敏度。该试剂具有出色的光学性能，是现代分子生物学和病理学研究中一种重要的荧光信号放大工具。

ATTO 425 染料的特性

ATTO 425 是一种高性能的蓝绿色荧光染料，激发波长约 436 nm，发射波长约 484 nm，发射光谱呈现亮丽的蓝绿色，荧光量子产率高，具有优异的光稳定性，适合高分辨率成像及多重标记实验。与传统染料（如 Alexa Fluor 430、DyLight 405 等）相比，ATTO 425 在水相环境中具备更高的荧光强度和耐光漂白能力，可在长期成像中提供稳定、可靠的信号。

Tyramide Signal Amplification (TSA) 技术原理

TSA 技术的核心是利用过氧化物酶催化 tyramide 衍生物的活化，使其生成高活性的自由基。这些自由基在短时间内迅速与周围的酪氨酸残基或其他蛋白质中的芳香族氨基酸发生共价结合，将荧光分子牢固地“沉积”在靶位点附近。这样，一分子 HRP 可催化数百甚至上千个 tyramide 分子的沉积，增强检测信号，实现超高灵敏度检测。

相较于传统的二级体荧光标记法，TSA 可将信号增强数倍甚至数百倍，尤其适用于检测低丰度靶标或进行多重荧光染色。由于共价结合的特性，TSA 也具备较强的耐洗涤能力，减少背景噪声，提升成像清晰度。

ATTO 425-TSA 的应用

免疫组织化学 (IHC)
ATTO 425-TSA 可用于组织切片染色，特别适合需要检测低表达蛋白的病理或研究样本。其高信噪比有助于清晰区分靶标和背景。

原位杂交 (ISH)
在 RNA 或 DNA 的原位杂交实验中，ATTO 425-TSA 提供了出色的灵敏度，便于检测微量核酸分子，如信使 RNA（mRNA）、非编码 RNA（lncRNA）或微小 RNA（miRNA）。

多重荧光标记
ATTO 425 的蓝绿色发射波段适合与其他荧光染料（如 Cy3、Cy5、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 647 等）配合，进行多重标记实验，无串色干扰，可实现精确的多靶标检测。

流式细胞术
虽然 TSA 主要用于固定组织或细胞，部分研究也将其应用于流式细胞术，提高检测灵敏度，尤其是在分析稀有细胞群时。

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