Amino-11-UTP(也称为氨基-11-UTP、Aminoallyl-UTP、11-氨基烷基-UTP)是一种化学修饰的核苷三磷酸,属于核苷酸衍生物,其分子由尿苷三磷酸(UTP)骨架,通过一段柔性的 11 碳烷基链与伯胺基团相连接。
分子结构与特性
在 Amino-11-UTP 的结构中,尿苷的核苷环保留了原本的碱基配对能力,不影响其在 RNA 合成过程中的碱基识别。而其独特之处在于核苷环上通过碳链接上一个伯胺基团。这个氨基链为 11 个碳的烷基链(Undecyl linker),提供了足够的柔韧性与空间,使氨基基团在掺入 RNA 后能远离核酸主链,降低空间位阻,并在后续标记中更加易于反应。氨基基团可以与多种官能团发生化学反应,如 NHS 酯、异硫氰酸酯、叠氮化物等,实现荧光、酶标、亲和标记或其他修饰。
Amino-11-UTP 在水溶液中溶解度良好,常以三钠盐的形式存在。其分子量较普通 UTP 稍大,但仍可被多种 RNA 聚合酶识别和掺入到 RNA 链中。
合成与制备
Amino-11-UTP 一般由化学合成制得。首先在尿苷分子 5 位引入具有活性的 linker,随后进行三磷酸化反应,后与三钠盐形成稳定的水溶性产品。现代合成工艺多采用磷酰氯法或磷酸吡咯啉法来完成三磷酸基团的引入,保证较高的纯度和产率。
Amino-11-UTP 的应用
RNA 掺入与标记
Amino-11-UTP 主要的应用是作为标记型 UTP 掺入 RNA。转录体系中用部分或全部 Amino-11-UTP 替代常规 UTP,可在 RNA 上引入伯胺基团。后续可通过 NHS 酯偶联荧光染料、biotin、酶标记物(如 HRP)、或其他探针,实现 RNA 的多种功能化修饰。这对于 RNA 探针制备、荧光原位杂交(FISH)、RNA pull-down、定量检测等实验至关重要。
荧光探针制备
使用 Amino-11-UTP 可高效制备荧光标记的 RNA 探针,如 Alexa Fluor、Cy3、Cy5 等荧光染料与氨基基团共价偶联,制成用于检测特定 mRNA、lncRNA 或病毒基因组 RNA 的探针。这类探针具有高灵敏度、低背景、信噪比高的优点。
生物芯片与微阵列
在 RNA 微阵列(microarray)检测中,通过 Amino-11-UTP 掺入的氨基基团,可与固相载体(如玻璃片、硅片)表面官能团(如环氧、醛基)形成共价键,将 RNA 探针牢固固定在芯片上,提高芯片信号的稳定性。
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