文献：脂质膜上的微粒组装途径

链接：https://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5

作者：卡斯帕· 范德韦尔1∙多丽丝 ·海因里希1,2∙丹妮拉·J· 克拉夫特1

节选：

化学品

苯乙烯 (99%)、衣康酸 (99%)、4,4'-偶氮双 (4-氰基戊酸) (98%)、D-葡萄糖 (99%)、牛血清白蛋白 (98%)、甲醇 (99.9%)、氯仿 (99%)、磷酸钠 (99%)、氧化氘 (70%)、N-羟基磺化琥珀酰亚胺钠盐 (98%) 和 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-4,4-二氟硼氮杂引达省苯 (97%, BODIPY) 购自 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO；甲氧基聚（乙二醇）胺 (mPEG, M W  = 5000) 购自 Alfa Aesar；氯化钠 (99%) 和叠氮化钠 (99%) 购自 Acros Organics； 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (99%)，来自 Carl Roth；NeutrAvidin (*生物素蛋白) 和霍乱毒素 B 亚基 Alexa Fluor 488 结合物 (霍乱毒素 488)，来自 Thermo Scientific；DNA 寡核苷酸 (生物素-5′-TTTAATATTA-3′-Cy3)，来自 Integrated DNA Technologies；以及来自Avanti Polar Lipids公司的Δ9-顺式1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱（DOPC）、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(生物素基(聚乙二醇)-2000) (DOPE-PEG-生物素)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰基) (DOPE-罗丹明)和G M1神经节苷脂(GM1)。所有化学品均按原样使用。所有实验均使用采用Millipore过滤系统(Milli-Q Gradient A10)获得的电阻率为18.2 M Ω cm的去离子水。

膜制备

采用标准电膨胀技术制备直径为 5 至 20  μm的巨型单层囊泡 (GUV) ( 14 )。在氯仿中制备 2 g/L 的脂质混合物，其由 97.5 wt.% DOPC、2.0 wt.% DOPE-PEG-生物素和 0.5 wt.% DOPE-罗丹明组成。接下来，取 10 μL该溶液在两块 6 cm2 的氧化铟锡涂层载玻片上（15–25𝛺，Sigma-Aldrich)，然后浸没在含有100 mM 葡萄糖和0.3 mM 叠氮化钠的49:51 D2O:H2O溶液中。为了诱导囊泡形成，将电*置于10 Hz 下1.1 V (rms) 电压下持续2小时。将由此获得的囊泡储存在室温牛血清白蛋白包被的小瓶中。为了抑制较小囊泡的数量，我们在使用前直接使用Whatmann 5.0 μm孔径硝酸纤维素过滤器过滤GUV 溶液( 15 )。对于膜管化实验，使用神经节苷脂GM1和染料霍乱毒素488对外膜小叶进行染色，如下所示：将上述氯仿中的脂质混合物转移到甲醇中，添加0.2 wt.％ GM1。然后按上述方法进行电膨胀。样品制备之前，将 50 mg/L 霍乱毒素 488 添加到磷酸盐缓冲盐溶液 (PBS) 中，仅对囊泡的外层进行染色。

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