文献：剪切流诱导的表面固定化脂质体的纳米管化

链接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2012/ra/c2ra00629d

作者：Yurina Sekine ab、 Keita Abe a、 Akitaka Shimizu a、 Yoshihiro Sasaki † * ac、 Shin-ichi Sawada d和 Kazunari Akiyoshi 

节选：

流体流动由一个封闭的通道腔室（μ-Slides VI，ibidi GmbH，德国慕尼黑）产生，该腔室可以避免弯月面和干燥效应，从而在腔室流道的较大区域内施加均匀的层流剪切流。该流道（亲水性；长 17 mm；宽 3.8 mm；高 0.4 mm）位于两个储液器之间，储液器通过鲁尔接头和硅胶管连接到计算机控制的注射泵（REGATO 100，KD Scientific，美国马萨诸塞州霍利斯顿）（图 1a ）。巨型脂质体通过亲和素-生物素相互作用固定在该腔室内（图 1b），基本与文献所述一致。12简而言之，将流道装满白蛋白牛生物素酰胺己酰 (BSA-生物素) 溶液 (2 mg mL −1溶于HEPES 缓冲液中，10 mM，pH 7.4)，孵育 10 分钟，然后用HEPES 缓冲液冲洗，得到生物素包被的通道。此过程重复两次，直至腔室表面完全被生物素-BSA 覆盖，如前所述。13然后将溶于HEPES 缓冲液的链霉亲和素 (II 型，1 mg mL −1 )添加到生物素包被的通道中，并在 40 分钟内吸附。*后，用HEPES 缓冲液冲洗通道两次。将由不同摩尔比的1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱 (DOPC) 和生物素修饰的磷脂(1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N- [生物素基（聚乙二醇）-2000]，DSPE-生物素) 组成的巨型脂质体引入流道，静置 10 分钟，使脂质体固定在通道内壁上。通过在果糖溶液14中温和水化脂质薄膜来制备巨型脂质体，并用少量 (0.5 mol%) 荧光脂质探针标记脂质体的双层，用于荧光显微镜检查(配备 DP70 彩色CCD 相机的Olympus IX71落射荧光显微镜，日本 Olympus)。

当剪切流（300 μL min −1 ，持续 2 分钟）施加到固定含有 1 mol% DSPE-生物素的脂质体的通道时，荧光显微镜图像（图 2a ）清楚地显示了管状结构，而观察到一些荧光团斑点，表明脂质体没有纳米管形成。该流速相当于 5 μN cm −2的剪切应力。在当前条件下，至少 40% 的脂质体（基于脂质体的数量）形成了纳米管。显微图像的荧光强度分析显示，直径小于 500 nm，分布范围为 17%，但由于荧光显微镜的光学限制，很难从显微图像中确定纳米管的确切直径。在大多数情况下，纳米管的延伸（下游）末端与其他脂质体相连，如图 2a所示。在相同的流动条件下，不含 DSPE-生物素的脂质体被从流道中冲走（数据未显示）。另一方面，当包埋有相对高浓度 DSPE-生物素（4 mol%）的巨型脂质体被固定并受到相同的剪切流时，脂质体结构保持在通道壁上（图 2b）。该结果表明脂质体的强结合抑制了管化。为了评估管化方向，在 5 到 10 个视图中记录了纳米管轴和流动方向之间的角度（θ ），并每 1°绘制纳米管数量（n ）对θ的图（图 2c）。在管化方向上发现了强烈的偏差，表明纳米管的形成方向与流体流动方向平行。

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