AF488标记链霉亲和素偶联物,AF488-Streptavidin的反应机理
AF488标记的链霉亲和素(Streptavidin-AF488)是一种将高亲和力生物素结合蛋白链霉亲和素与Alexa Fluor 488荧光染料偶联的生物探针,常用于免疫荧光染色、荧光原位杂交(FISH)、细胞标记、组织成像及其他生物学检测中。AF488是一种绿色荧光染料,具有高量子产率与光稳定性,激发/发射峰值为495/520 nm,适合与常规FITC通道兼容的荧光显微成像。
该偶联物的合成基于AF488-NHS酯与链霉亲和素表面可及的赖氨酸残基反应,形成稳定的共价酰胺键。该反应是一种典型的N-酰化反应,其机理为:NHS酯在碱性环境中被赖氨酸ε-氨基的亲核攻击,羧酸活性酯断裂后释放NHS并形成酰胺键。该反应对水敏感,需在无水DMSO中溶解染料后迅速加入缓冲液中的蛋白溶液中。反应体系pH维持在8.3~8.5,以增强氨基的亲核性,同时避免蛋白变性。
反应后采用分子筛柱(如Sephadex G-25)或透析去除游离染料,确保偶联产物的纯度和信噪比。每个链霉亲和素分子含有四个位点可结合生物素,其高亲和力(Kd ~10^-15 M)使其在二级检测体系中成为理想工具,能够与生物素标记的抗体、核酸、脂质等靶标高效结合,放大信号。
AF488标记的链霉亲和素应避光保存于4°C,并避免反复冻融以保持荧光活性和结合力。其应用特点包括背景低、信号强、通道兼容性好,在细胞与组织标记、荧光双标、微阵列等平台均表现优异。
产品名称:AF488标记链霉亲和素偶联物,AF488-Streptavidin
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。
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