FITC-ADP,FITC-二磷酸腺苷,ADP-FITC异硫氰酸荧光素的合成步骤
FITC-ADP(Fluorescein isothiocyanate–adenosine diphosphate)是一种将异硫氰酸荧光素(FITC)标记至腺苷二磷酸(ADP)上的荧光核苷酸衍生物,常用于研究核苷酸受体、酶活性和细胞信号转导等生物过程。该合成通常依赖于FITC与ADP分子中可反应的胺基之间形成稳定的硫脲键。
合成步骤如下:
原料准备:使用高纯度的ADP二钠盐和FITC(常用5-或6-异构体),反应在无水环境中进行以避免核苷酸降解。ADP在结构上具有一个初级胺基来自腺嘌呤的6-氨基位点,可作为与FITC反应的位点。
缓冲液溶解:将ADP溶解于碳酸氢钠缓冲液(pH 8.5),这一碱性环境有助于提高胺基的亲核性。FITC溶于少量无水DMSO或DMF,以确保其活性。
偶联反应:将FITC溶液逐滴加入ADP溶液中,在避光条件下于室温或4°C轻微搅拌反应数小时至过夜。反应期间,FITC的异硫氰酸基团与ADP的胺基反应,形成稳定的硫脲键,构建荧光标记的核苷酸。
纯化:反应完成后,使用反相高效液相色谱(HPLC)进行分离,洗脱并收集FITC-ADP产物。其他方法如透析、凝胶过滤层析也可用于除去游离FITC与未反应ADP。
验证:通过紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)和荧光光谱确认产物具有典型的FITC吸收(约495 nm)和发射波长(约520 nm)。同时可采用质谱(如ESI-MS)验证分子量,进一步确认结合位点。
终产物FITC-ADP是一种亲水性、荧光性核苷酸衍生物,适合用于体外和细胞环境中的生物分子标记和探针构建。
产品名称:FITC-ADP,FITC-二磷酸腺苷
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.06.23