产品名称:CY7标记PE藻红蛋白的合成方法
合成方法
CY7活化
步骤:将CY7-NHS酯溶解于无水DMF或DMSO,加入三乙胺(TEA)催化,室温避光反应30分钟。
PE预处理
纯化:通过硫酸铵沉淀或凝胶过滤去除杂质,浓度调整至5-10 mg/ml。
缓冲液:使用pH 7.0-7.4的磷酸盐缓冲液(PB)维持稳定性。
偶联反应
条件:活化后的CY7与PE在弱碱性条件(pH 8.0-9.0)下混合,室温避光搅拌4-8小时。
摩尔比:CY7与PE的摩尔比通常为1:1至5:1,确保高效标记。
纯化与表征
初步纯化:通过透析(截留分子量30 kDa)或凝胶渗透色谱(GPC)去除未反应物质。
深度纯化:反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离目标产物,纯度>90%。
结构验证:质谱(MS)、核磁共振氢谱(¹H NMR)及红外光谱(FT-IR)确认共价结合。
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