AF488 Tetrazine(Alexa Fluor 488 Tetrazine)是将高性能绿色荧光染料Alexa Fluor 488(AF488)与活性四嗪基团(tetrazine)通过共价键连接得到的一种生物正交荧光标记试剂。
它结合了高灵敏度、光稳定的荧光特性和四嗪的快速生物正交反应能力,广泛应用于蛋白质、核酸、脂质及纳米材料的特异性标记、成像与分子示踪,是现代化学与生物交叉研究领域的理想工具。
结构组成与基本性质
AF488 Tetrazine由两个核心部分构成:
Alexa Fluor 488染料
Alexa Fluor 488是一种明亮的绿色荧光染料,激发峰位于约495 nm,发射峰约519 nm,具有高量子产率、光稳定性和水溶性,常用于荧光显微成像、流式细胞术等。其荧光性能优于传统的FITC等染料,能在生物样本中产生高对比度、低背景的图像。
四嗪(Tetrazine)官能团
四嗪是一种含四个氮原子的芳香杂环化合物,在生物正交化学中被广泛应用。AF488所连接的通常是6-位取代的1,2,4,5-四嗪衍生物,它能与应变烯烃类底物(如TCO、BCN、DBCO等)通过逆电子需双烯(IEDDA)反应快速共价结合,反应速率高达10⁴–10⁶ M⁻¹·s⁻¹,无需催化剂即可在生理条件下进行,且具有选择性和效率。
核心优势
生物正交反应性能卓越
AF488 Tetrazine可与TCO(trans-cyclooctene)、BCN(bicyclononyne)等底物在水相环境下迅速发生点击式IEDDA反应。该反应不干扰细胞代谢或其他官能团,不需要铜离子等催化剂,适合活细胞和体内环境使用。
高荧光亮度与稳定性
AF488的荧光信号强、抗光漂白性能优异,可在激光共聚焦显微镜和流式细胞仪中获得高质量图像,特别适用于活细胞或组织的实时成像和长时间观察。
水溶性好,易于操作
该分子在水溶液中具有良好溶解度,适合各种缓冲液体系,能直接用于生物样本的标记与反应,无需复杂的有机相操作。
共价结合,信号稳定
AF488 Tetrazine与目标TCO修饰分子发生反应后,形成稳定的共价键,染料不会游离或脱落,确保信号持久性和重复性。
应用场景
生物分子标记
AF488 Tetrazine可用于与TCO修饰的蛋白质、抗体、寡核苷酸、肽链等共轭,实现特异性荧光标记和定量分析。例如,已TCO化的抗体或探针可在加入AF488 Tetrazine后实现荧光标记,用于免疫检测或靶向成像。
活细胞成像
由于反应条件温和、无毒副作用,该试剂适合用于活细胞荧光标记,包括膜蛋白、糖类修饰物或代谢标记物的特异性检测。
点击化学示踪
AF488 Tetrazine可以标记TCO修饰的小分子探针或代谢物,适用于药物递送系统、分子运输路径研究及细胞内示踪实验。
组织成像与活体成像
在动物模型中,AF488 Tetrazine可用于TCO修饰抗体或纳米颗粒的体内标记,实现组织分布成像和病灶定位。
多重标记实验
可与不同颜色的Tetrazine或其他正交标记试剂(如Azide、NHS等)组合,用于多通道、多靶点荧光实验,提高分析通量。
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