AMCA-NHS Ester（全称为 7-氨基-4-甲基香豆素-N-羟基琥珀酰亚胺酯），是一种带有活性酯基团的蓝色荧光染料，广泛用于与胺类（—NH₂）分子（如蛋白质、抗体、肽、多糖、表面分子等）发生共价结合，从而形成稳定的荧光标记物。 

AMCA 是 7-Amino-4-MethylCoumarin（7-氨基-4-甲基香豆素）的简称，属于香豆素类荧光团，具有高稳定性、良好的水溶性和优异的荧光特性；而 NHS 酯（N-Hydroxysuccinimide ester）部分则提供了与伯胺快速、定向偶联的化学活性。该染料在荧光显微镜、流式细胞术、荧光免疫检测、FRET 实验等多个方向上都有广泛应用。

常用名 7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸 N-琥珀酰亚胺酯

英文名 7-AMINO-4-METHYL-3-COUMARINACETIC ACID N-SUCCINIMIDYL ESTER

CAS号 113721-87-2

分子量 330.29200

密度 1.5g/cm3

沸点 559.4ºC at 760mmHg

分子式 C16H14N2O6

熔点 N/A

闪点 292.1ºC

作用原理与化学机制

AMCA-NHS ester 的关键在于 NHS酯与伯胺反应 的偶联机制：

NHS 酯可在中性或微碱性条件下（pH 7.2–8.5）与目标分子上的伯胺基团（如赖氨酸残基）发生高效酰胺化反应；

此反应无需催化剂，快速且专一，反应生成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺副产物；

偶联后，AMCA荧光基团即稳定附着于靶分子上，可用于成像、检测或示踪。

应用领域

蛋白质与抗体标记
通过与蛋白质上的伯胺基结合，AMCA-NHS 可用于制备荧光标记抗体、酶或其他蛋白质，用于免疫荧光、ELISA、Western blot 等实验中进行定量或定位分析。

荧光显微镜多重染色
由于其激发/发射波长远离常见染料如 FITC（绿色）或 Cy3（橙红），AMCA 非常适合做为蓝色通道染料，用于细胞核、结构蛋白或胞内小分子等成分的荧光共染。

流式细胞术（FACS）分析
AMCA-NHS 标记的抗体可用于流式细胞仪的 UV 激光通道，适合进行免疫表型分析、多色细胞分类等。

FRET（荧光共振能量转移）实验
可作为能量供体染料与绿色或黄色荧光蛋白配对，用于蛋白-蛋白相互作用或分子构象变化的探测。

亲和层析材料功能化
将 AMCA-NHS 偶联到硅胶、琼脂糖或其他固相载体上，用于制备荧光可视化的亲和纯化填料。

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