AF350 NHS Ester，即 Alexa Fluor 350 N-羟基琥珀酰亚胺酯，是一种高性能的紫外-蓝色荧光染料活性酯，属于Thermo Fisher Scientific Alexa Fluor系列。它结合了Alexa Fluor 350染料的优异光学性能与NHS酯的化学活性，广泛应用于蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的共价荧光标记。

该染料因其激发波长较短，发射在蓝色荧光区域，适合用于多色荧光分析中“短波长通道”的标记需求。其高量子产率和光稳定性，使其在高灵敏度的荧光检测和显微成像中表现优异。

偶联机制与反应条件

AF350 NHS Ester通过NHS活性酯基团与生物大分子（蛋白质、肽、抗体、核酸等）中的伯胺基团发生亲核取代反应，形成稳定的共价酰胺键，实现标记。

反应条件：

缓冲液pH一般为7.4至8.5，最佳为8.0左右

反应温度室温或4°C

避光进行，防止光漂白

反应时间：一般30分钟到1小时

注意事项：避免游离氨基和水分过多，防止NHS酯水解降低偶联效率

应用领域

蛋白质标记与分析
AF350 NHS Ester用于标记蛋白质和抗体，帮助研究者进行免疫荧光染色、Western blot检测、免疫沉淀和蛋白质定位等研究。

流式细胞术
作为紫外激发荧光染料，AF350可用于流式细胞仪的紫外激光通道，多色多参数分析中“蓝紫通道”的荧光标记。

荧光显微成像
适合细胞及组织样本的共聚焦显微镜、超分辨率显微镜等，尤其适合与其他Alexa Fluor染料搭配进行多色荧光共定位实验。

核酸及寡核苷酸标记
通过偶联含氨基修饰的寡核苷酸，制备高灵敏度的FISH探针和PCR荧光探针。

生物传感器与动力学研究
可结合酶、受体等生物分子，制备荧光传感器，实现动力学及相互作用研究。

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