产品名称:生物素标记烟曲霉素,Biotinylated Cycloheximide,Fumagillin的生物素标记策略
生物素标记策略
1. 标记位点选择
Fumagillin:
环氧环:反应活性高,但可能破坏生物活性,需谨慎选择。
羟基/氨基:优先选择分子末端的羟基(如C-22位)或引入氨基接头,通过酰胺键或酯键连接生物素。
Cycloheximide:
氯代苯基:可通过亲核取代反应引入接头(如氨基或羧基)。
环己酮:需保护酮基,避免副反应。
2. 化学偶联方法
直接标记:
NHS-生物素:适用于含氨基的Fumagillin衍生物,在pH 7-8条件下形成稳定酰胺键。
生物素-马来酰亚胺:若Fumagillin含巯基(如通过半胱氨酸修饰),可通过迈克尔加成反应偶联。
间接标记:
引入接头:使用聚乙二醇(PEG)或己二酸二酰肼(ADH)作为间隔臂,提高标记物的水溶性和灵活性。
点击化学:通过叠氮化物-炔烃环加成反应(CuAAC或SPAAC)实现高效、特异性标记。
3. 标记效率优化
反应条件:
温度:室温至40℃,避免高温导致Fumagillin降解。
溶剂:DMSO或DMF(需控制比例,防止蛋白质变性)。
pH:中性至弱碱性(pH 7.5-8.5),促进酰胺键形成。
纯化方法:
HPLC(C18柱):分离未反应的生物素和副产物。
透析或超滤:去除小分子杂质,获得高纯度标记物。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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