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生物素标记烟曲霉素,Biotinylated Cycloheximide,Fumagillin的生物素标记策略
发布时间:2025-08-08     作者:wyh   分享到:

产品名称:生物素标记烟曲霉素,Biotinylated Cycloheximide,Fumagillin的生物素标记策略

生物素标记策略

1. 标记位点选择

Fumagillin:

环氧环:反应活性高,但可能破坏生物活性,需谨慎选择。

羟基/氨基:优先选择分子末端的羟基(如C-22位)或引入氨基接头,通过酰胺键或酯键连接生物素。

Cycloheximide:

氯代苯基:可通过亲核取代反应引入接头(如氨基或羧基)。

环己酮:需保护酮基,避免副反应。

2. 化学偶联方法

直接标记:

NHS-生物素:适用于含氨基的Fumagillin衍生物,在pH 7-8条件下形成稳定酰胺键。

生物素-马来酰亚胺:若Fumagillin含巯基(如通过半胱氨酸修饰),可通过迈克尔加成反应偶联。

间接标记:

引入接头:使用聚乙二醇(PEG)或己二酸二酰肼(ADH)作为间隔臂,提高标记物的水溶性和灵活性。

点击化学:通过叠氮化物-炔烃环加成反应(CuAAC或SPAAC)实现高效、特异性标记。

3. 标记效率优化

反应条件:

温度:室温至40℃,避免高温导致Fumagillin降解。

溶剂:DMSO或DMF(需控制比例,防止蛋白质变性)。

pH:中性至弱碱性(pH 7.5-8.5),促进酰胺键形成。

纯化方法:

HPLC(C18柱):分离未反应的生物素和副产物。

透析或超滤:去除小分子杂质,获得高纯度标记物。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

生物素标记烟曲霉素,Biotinylated Cycloheximide,Fumagillin

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