CY5.5-Streptavidin，CY5.5标记链霉亲和素的合成步骤

CY5.5标记链霉亲和素是将近红外荧光染料CY5.5与链霉亲和素蛋白通过共价键连接形成的荧光标记物。链霉亲和素是一种四聚体蛋白，具有极强的生物素结合能力，常用作生物标记、分子捕获及信号放大系统的核心组成部分。通过CY5.5标记，可使链霉亲和素具备近红外成像功能，实现高灵敏度的生物检测与分子追踪。

合成步骤

链霉亲和素的制备与缓冲液置换

链霉亲和素通常购自商业纯品或通过重组表达获得。为确保标记反应的有效性，蛋白需置换至无氨基缓冲液（如PBS pH 7.4）或含弱碱性的缓冲液中，避免Tris等含有游离氨基的缓冲体系干扰偶联反应。

CY5.5-NHS酯的准备

使用含活性NHS酯的CY5.5染料，溶于无水DMSO或DMF，保证高活性。该活性酯能够与蛋白表面的赖氨酸氨基高效反应。

标记反应

将链霉亲和素溶液与适量的CY5.5-NHS酯混合，反应温度一般控制在室温，反应时间为1-2小时。此过程通过Cy5.5-NHS酯与蛋白赖氨酸残基上的初级氨基发生酰胺化反应，实现共价连接。为了保证标记效率与蛋白活性，反应条件需精确控制，避免过度标记导致蛋白构象改变。

终止反应与缓冲液交换

反应完成后，通过加入含有游离氨基的Tris缓冲液终止反应。随后利用透析或分子筛色谱（如Sephadex G-25）去除未反应的游离染料及小分子杂质，同时置换到适合储存和应用的缓冲液中。

纯化与浓缩

根据需要，可采用凝胶过滤层析或亲和层析进一步纯化标记蛋白，去除多余的染料和反应副产物。浓缩步骤使用超滤设备调节蛋白浓度，满足后续实验需求。

表征

通过紫外-可见分光光度计测定蛋白与染料的吸收峰，计算标记度。荧光光谱确认近红外发射性能。SDS-PAGE电泳结合荧光成像可检测蛋白的标记情况。生物活性通过生物素结合能力实验（如ELISA或生物层干涉技术）验证，确保标记后蛋白结构与功能未受影响。

产品名称：CY5.5-Streptavidin，CY5.5标记链霉亲和素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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