产品名称：Sulfo-Cy5 alkyne，磺化CY5-炔基的使用方法

使用方法

标记前准备：

目标分子处理：

蛋白质/核酸：确保目标分子含叠氮基团（如通过代谢标记或化学修饰引入）。

细胞/组织：若需活细胞标记，需选择SPAAC反应（避免铜毒性）。

缓冲液选择：

推荐缓冲液：PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.0）或Tris-HCl（pH 7.5），避免含螯合剂（如EDTA）的缓冲液（CuAAC需铜离子）。

添加剂：

CuAAC：添加CuSO₄（1-5 mM）和抗坏血酸钠（5-10 mM）作为铜催化剂和还原剂。

SPAAC：无需添加剂，直接使用含环辛炔（如DBCO-Sulfo-Cy5）的试剂。

标记反应：

摩尔比：通常Sulfo-Cy5 alkyne与目标分子的摩尔比为1:1-5:1（过量染料可提高标记效率，但需后续纯化去除未反应染料）。

反应体系：

CuAAC：将Sulfo-Cy5 alkyne溶解于DMSO或DMF（终浓度≤10% v/v），加入含目标分子和铜催化剂的缓冲液中，室温孵育1-2小时。

SPAAC：直接混合含叠氮基团的目标分子与含环辛炔的Sulfo-Cy5试剂（如DBCO-Sulfo-Cy5），室温孵育30分钟至2小时。

反应终止：

CuAAC：通过脱盐柱或透析去除铜催化剂和未反应染料。

SPAAC：无需终止，直接纯化。

纯化与验证：

纯化方法：

透析：适用于大分子（如蛋白质）的纯化，去除未反应染料和小分子杂质。

凝胶过滤：使用Superdex 75或200柱分离标记产物与未反应染料。

HPLC：反相HPLC（如C18柱）可高效分离标记多肽或小分子。

验证方法：

荧光检测：通过荧光分光光度计或凝胶成像系统验证标记产物的荧光发射。

SDS-PAGE：对标记蛋白质进行电泳分析，观察荧光条带与蛋白条带是否一致。

质谱：通过MALDI-TOF或ESI-MS确认标记产物的分子量变化。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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