产品名称：Cy3 Acid(mono SO3)的使用方法

使用方法

标记前准备：

目标分子处理：

蛋白质/多肽：确保目标分子含游离氨基（如赖氨酸残基或 N 端氨基）。若氨基被保护（如用乙酰基保护），需先通过碱性条件（如 0.1 M NaOH）脱保护。

缓冲液选择：

推荐缓冲液：PBS（pH 7.4）、MES（pH 6.0）或 HEPES（pH 7.0），避免含氨基的缓冲液（如 Tris 或甘氨酸）。

添加剂：可添加少量有机溶剂（如 DMSO 或 DMF，终浓度 ≤5% v/v）提高染料溶解度。

标记反应：

EDC/NHS 活化羧基：

步骤：

将 Cy3 Acid (mono SO₃) 溶解于 DMSO 或 DMF（终浓度 ≤10% v/v）。

加入 EDC（终浓度 5-10 mM）和 NHS（终浓度 10-20 mM），室温活化羧基 15-30 分钟。

将活化后的染料加入含目标分子的缓冲液中，室温孵育 1-2 小时。

摩尔比：通常染料与目标分子的摩尔比为 1:1-5:1（过量染料可提高标记效率，但需后续纯化去除未反应染料）。

直接标记（无活化）：

适用场景：若目标分子氨基反应活性高（如抗体），可直接混合染料与分子，室温孵育 2-4 小时。

注意事项：需优化染料浓度和反应时间以避免过度标记导致荧光淬灭。

纯化与验证：

纯化方法：

脱盐柱：适用于大分子（如蛋白质）的纯化，去除未反应染料和小分子杂质。

凝胶过滤：使用 Superdex 75 或 200 柱分离标记产物与未反应染料。

HPLC：反相 HPLC（如 C18 柱）可高效分离标记多肽或小分子。

验证方法：

荧光检测：通过荧光分光光度计或凝胶成像系统验证标记产物的荧光发射。

SDS-PAGE：对标记蛋白质进行电泳分析，观察荧光条带与蛋白条带是否一致。

质谱：通过 MALDI-TOF 或 ESI-MS 确认标记产物的分子量变化。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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