产品名称:Cy5-Hemoglobin,花菁素染料CY5标记血红蛋白的标记原理与制备
一、Cy5与血红蛋白的核心特性
1. Cy5染料:远红色荧光探针
光谱特性:Cy5属于花菁染料家族,激发波长约650nm(红光),发射波长约670nm(远红色荧光),处于生物组织的光学窗口(650-900nm),可减少光散射和吸收,适合深层组织成像。
应用优势:荧光亮度高、光稳定性优于传统染料(如TRITC),且远红色荧光背景干扰低,适合多色标记(如与GFP、Cy3组合)。
2. 血红蛋白(Hemoglobin):氧运输核心蛋白
结构与功能:血红蛋白是红细胞中的四聚体蛋白(α₂β₂),每个亚基含一个血红素基团(含Fe²⁺),通过与氧气结合(氧合)和释放(脱氧)实现氧运输。
生物特性:
氧结合能力:受pH、CO₂浓度和2,3-BPG(二磷酸甘油酸)调节,是研究氧代谢的关键分子。
抗原性:人血红蛋白具有种属特异性,可用于交叉配血或输血反应研究。
二、Cy5-Hemoglobin的标记原理与制备
1. 标记原理
反应基团:Cy5的活性形式(如Cy5-NHS酯)与血红蛋白的氨基(赖氨酸的ε-氨基)发生 共价偶联,形成稳定的酰胺键。
反应条件:通常在pH 7.5-8.5的缓冲液(如PBS)中进行,室温或4℃避光反应2-4小时,通过透析或凝胶过滤去除未结合的Cy5。
2. 制备关键点
标记比例控制:Cy5与血红蛋白的摩尔比需优化(通常1-5:1),过高可能导致血红蛋白亚基聚集或血红素环境改变,影响氧结合能力;过低则荧光信号不足。
活性验证:标记后需检测血红蛋白的氧结合功能是否保留,可通过 氧解离曲线实验(测定P50值,即血红蛋白50%饱和时的氧分压)或 光谱法(观察血红素吸收峰变化)验证。
纯化步骤:通过透析(截留分子量12-14kDa)或凝胶过滤(如Superdex 200)去除游离Cy5,避免背景荧光干扰。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有:近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯,二氧化硅及介孔二影产品,荧光蛋白及荧光探针等,欢迎咨询。
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