产品名称：FITC-Insulin，异硫氰酸荧光素-胰岛素的标记原理

一、FITC与胰岛素的核心特性

1. FITC染料：绿色荧光探针

光谱特性：FITC（异硫氰酸荧光素）是经典的荧光素类染料，激发波长约495nm（蓝光），发射波长约525nm（绿色荧光），荧光亮度高，但光稳定性相对较弱（需避光操作）。

反应活性：FITC的异硫氰酸酯基团（-N=C=S）可与蛋白或小分子中的氨基（-NH₂）反应，生成稳定的硫代氨基甲酸酯键，是荧光标记的常用方法。

2. 胰岛素（Insulin）：关键代谢激素

结构与功能：胰岛素是由51个氨基酸组成的蛋白质激素，含A链（21个氨基酸）和B链（30个氨基酸），通过两个二硫键连接（A链内一个，A-B链间一个）。其核心功能是结合细胞表面胰岛素受体（IR），激活下游信号通路（如PI3K-Akt），促进葡萄糖转运蛋白（GLUT4）易位至细胞膜，从而降低血糖。

临床相关性：胰岛素是1型糖尿病（T1DM）和部分2型糖尿病（T2DM）的核心治疗药物，但其体内分布、代谢及与受体相互作用机制仍需深入解析。

二、FITC-Insulin的标记原理与制备

1. 标记原理

反应基团：FITC的异硫氰酸酯基团与胰岛素的氨基（如B链N-末端苯丙氨酸的α-氨基或赖氨酸的ε-氨基）发生 共价偶联，生成硫代氨基甲酸酯键。反应通常在弱碱性条件（pH 8.5-9.5）下进行，以提高氨基的反应活性。

反应条件：将胰岛素溶解于碳酸盐缓冲液（pH 9.0），加入FITC（摩尔比通常为1:1-5:1），室温避光反应2-4小时，通过透析或凝胶过滤（如Sephadex G-25）去除未结合的FITC。

2. 制备关键点

标记比例控制：FITC与胰岛素的摩尔比需优化（通常1:1-3:1），过高可能导致胰岛素的二硫键被破坏或受体结合能力下降；过低则荧光信号不足。

活性验证：标记后需通过 体外活性实验（如检测胰岛素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的促进作用）或 体内实验（如注射至糖尿病小鼠，监测血糖下降幅度）验证胰岛素的降血糖功能是否保留。

纯化步骤：通过透析（截留分子量3.5kDa）或凝胶过滤（如Superdex 75）去除游离FITC，避免背景荧光干扰实验结果。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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