常用名 磺基花青5 NHS酯
英文名 Sulfo-Cy 5 NHS Ester
CAS号 2230212-27-6
分子量 761.8368
分子式 C36H40N3NaO10S2
sulfo-Cy5(Me) 活性酯 是一种基于 氰碱染料(Cyanine dye, Cy 系列) 的红色荧光探针。它在 Cy5 荧光染料 的分子骨架上,引入了 磺酸基团(–SO₃⁻) 以增强水溶性,同时通过 NHS 活性酯(N-hydroxysuccinimide ester) 进行官能化,使其能够与生物大分子上的 伯胺(–NH₂) 特异性反应,形成稳定的酰胺键。
结构与化学特性
Cy5 荧光骨架
属于 多甲炔氰碱染料,具有共轭 π 体系,能够吸收红光并发射远红光。
激发波长约 640 nm,发射波长约 660–670 nm,呈鲜明的红色荧光。
由于发射波段较长,可有效避免生物样品的自发荧光干扰,信噪比更高。
磺酸基修饰(sulfo-)
引入磺酸基团后,染料分子带负电荷,显著提高了在水溶液及缓冲体系中的溶解性。
相比于普通的 Cy5 活性酯,sulfo-Cy5(Me) 更适合在 生理条件下 使用,无需大量有机溶剂作为助溶剂。
NHS 活性酯
其活泼羧酸酯结构可以与分子中的伯胺(如赖氨酸侧链、肽链 N 端氨基等)高效反应。
反应条件温和,通常在 pH 7.0–8.5 的缓冲液中即可进行。
生成的酰胺键稳定,不易水解或断裂。
反应与标记特性
反应对象
蛋白质(赖氨酸残基)
多肽或小分子(带有自由氨基)
修饰过的核酸(在 5’ 或 3’ 端引入氨基修饰)
表面功能化的纳米颗粒或聚合物
反应条件
最佳反应 pH:7.2–8.5
反应时间:30 分钟–2 小时
温度:室温或 4℃(避免活性酯快速水解)
溶剂体系:通常在 PBS 或 HEPES 缓冲液中,必要时可加入少量 DMSO 或 DMF 促进溶解
反应结果
与氨基形成 共价酰胺键,标记效率高。
标记后的生物分子在水溶液中依然保持良好溶解性和荧光性能。
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