FITC-MMP9，荧光素标标记MMP9多肽的制备步骤

FITC-MMP9是将异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）共价标记在MMP9（基质金属蛋白酶9）特异性多肽上的荧光衍生物。MMP9多肽是MMP9的特异性底物序列，常含有可被MMP9酶识别和切割的肽段，如PLGLWA或类似序列，具有明确的酶解位点。通过FITC标记，该多肽可在体外或细胞体系中实现实时荧光监测，评估MMP9的酶学活性、底物特异性及抑制剂效果，是酶活性分析、药物筛选和分子成像研究的重要工具。

FITC-MMP9的制备方法核心在于利用FITC的异硫氰酸基团（–N=C=S）与多肽分子上的伯氨基或N端氨基形成稳定硫脲键（–NH–C(=S)–NH–），实现共价标记。通常选择的多肽合成方式为固相肽合成（SPPS, Solid-Phase Peptide Synthesis），通过Fmoc或Boc策略获得高纯度多肽。合成完成后的多肽在末端保留自由氨基，为FITC偶联提供反应位点。

具体制备步骤如下：

多肽溶解：将干燥的MMP9特异性多肽溶解于适宜的缓冲溶液中（如0.1 M碳酸氢钠缓冲液，pH 8.0–9.0），以确保氨基处于非质子化状态，便于亲核反应。

FITC溶解：FITC通常溶解于少量无水二甲基亚砜（DMSO）或碳酸盐缓冲液中，保持避光条件以防荧光团降解。

偶联反应：在搅拌条件下，将FITC溶液缓慢加入多肽溶液中，控制FITC与多肽摩尔比（通常1.2–2倍）以优化标记效率并减少多重标记。反应在室温或低温（4–25℃）下进行2–12小时，避光防止荧光衰减。

终止反应与纯化：反应完成后，可通过加入甘氨酸或氨水终止多余FITC的反应。随后使用高效液相色谱（HPLC）纯化FITC-MMP9，去除未反应的FITC及副产物。纯化后的产物通过质谱（MS）和液相分析（HPLC或UPLC）确认分子量与标记程度，确保纯度和功能性。

FITC-MMP9制备中需注意的条件包括：反应pH的控制，以保证氨基活性且避免多肽结构变性；反应温度和光照控制，避免荧光团降解；FITC与多肽摩尔比的优化，以控制标记密度，既保证荧光信号，又保持多肽的酶切位点可识别性。

制备完成的FITC-MMP9具有的荧光特性（激发约495 nm，发射约520 nm），可用于MMP9活性检测、酶动力学分析以及抑制剂筛选。其稳定的硫脲键保证了荧光标记在实验条件下不易脱落，而保留的多肽序列确保MMP9能够特异性识别和切割。FITC-MMP9还可扩展至细胞成像实验，用于追踪MMP9活性分布或验证纳米载体的酶响应特性。

总之，FITC-MMP9是一种结合荧光示踪功能和酶底物特异性的多肽衍生物，其制备方法包括固相合成多肽、FITC偶联反应以及HPLC纯化等步骤，强调反应条件的控制与标记效率优化。该产物不仅保留了多肽的酶学识别能力，还具有可视化荧光功能，应用于生物化学、药物筛选和分子成像研究，为MMP9相关实验提供高效、可靠的工具。

产品名称：FITC-MMP9，荧光素标标记MMP9多肽

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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