CY5.5-Paeonol，花菁染料CY5.5标记丹皮酚的合成策略与设计

CY5.5-Paeonol 是由活性小分子丹皮酚（Paeonol，化学名2’-hydroxy-4’-methoxyacetophenone）与花菁染料CY5.5偶联得到的近红外荧光探针。丹皮酚是牡丹皮中的主要活性成分，具有芳香酚类结构，分子式C9H10O3，结构中含有一个酚羟基、一个甲氧基和一个乙酰基。酚羟基是具反应活性的位点，为与染料的共价结合提供了可能。CY5.5则是一种常用的近红外花菁染料，激发波长约675 nm，发射波长在695–710 nm，具有高灵敏度和良好组织穿透性。通过偶联丹皮酚与CY5.5，可构建兼具产物活性与光学特性的荧光探针，在分子示踪、复合材料构建与生物成像研究中具有价值。

合成策略与设计

丹皮酚分子较小，直接偶联可能引发溶解性差和空间位阻问题，因此通常通过引入连接臂（linker）改善结构灵活性和稳定性。常用方法是先对丹皮酚羟基进行琥珀酸化，引入一个羧基功能团，再利用羧基与CY5.5-NHS ester发生酰胺键偶联。这样既保留了丹皮酚的酚环骨架，也确保CY5.5的光学特性不受破坏。合成过程一般分为三步：丹皮酚活化修饰、中间体活泼酯制备、与CY5.5偶联。

合成过程研究

丹皮酚活化修饰

将丹皮酚溶于无水吡啶或DMF溶剂中，加入适量琥珀酸酐及少量催化剂（DMAP），在室温或30–40 ℃下搅拌反应4–6小时。

反应主要发生在丹皮酚的酚羟基位点，生成丹皮酚-琥珀酸单酯（Paeonol-succinate）。

产物经乙酸乙酯萃取、饱和NaHCO₃溶液洗涤，除去过量琥珀酸酐与副产物。粗产物通过硅胶柱层析纯化，得到带羧基的中间体。

丹皮酚-NHS活泼酯的制备

将Paenol-succinate溶于无水DMF中，依次加入EDC·HCl和NHS，反应数小时。

该步骤将羧基活化为NHS酯，生成Paeonol-succinate-NHS ester，具有较高反应活性。

由于该中间体容易水解，应在惰性气氛和避光条件下操作，并尽快用于偶联反应。

与CY5.5偶联

取CY5.5带有伯胺基团的衍生物（如CY5.5-amine），溶于少量DMF，缓慢加入上述Paeonol-NHS ester溶液。

在碱性条件（如DIPEA作碱性催化剂）下搅拌12–24小时，酰胺键形成，实现丹皮酚与染料的稳定共价偶联。

反应结束后，经旋蒸除去有机溶剂，残渣用甲醇/水混合溶解，并进行初步除盐处理。

纯化与收集

粗产物可通过反相C18柱进行分离，梯度洗脱体系为水（含0.1%TFA）与乙腈。

CY5.5染料的近红外吸收特征（675 nm）便于检测产物峰。

目标组分收集后经冻干，得到深红色固体CY5.5-Paeonol。

反应条件与优化研究

溶剂选择：DMF和DMSO对CY5.5溶解度较好，是常用反应介质；吡啶在酯化步骤中兼作溶剂和碱性催化剂。

摩尔比控制：丹皮酚与琥珀酸酐通常采用1:2摩尔比，以确保羟基充分转化；与CY5.5偶联时，Paeonol-NHS ester与染料胺基比例控制在1.2–1.5:1，以提高反应收率。

温度与时间：琥珀酸化宜在30–40 ℃进行，防止过度副反应；偶联反应在室温避光下12–24小时可获得较佳结果。

副产物控制：主要副产物为二酯或未完全偶联的中间体，可通过制备型HPLC分离。

总结

CY5.5-Paeonol的合成路线以丹皮酚酚羟基的琥珀酸化为起点，通过活化形成NHS酯，再与含胺基的CY5.5偶联，构建稳定的酰胺键连接。该方法合成思路清晰，条件温和，可获得高纯度荧光标记产物。研究显示，引入连接臂不仅提升了偶联效率，也改善了探针的水溶性和空间伸展性，使其更适用于生物体系的荧光示踪和功能研究。通过进一步优化溶剂、摩尔比与纯化条件，可稳定获得纯度大于95%的CY5.5-Paeonol，为产物分子探针化研究提供了一条可靠路径。

产品名称：CY5.5-Paeonol，花菁染料CY5.5标记丹皮酚

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09