CY5.5-choline，花菁染料CY5.5标记胆碱的合成步骤

Cy5.5-Choline 是由胆碱（Choline, HO–CH2–CH2–N+(CH3)3）与近红外染料Cy5.5偶联而成的荧光探针。胆碱是一种小分子季铵盐，存在于生物体系中，分子含有一个羟基和带正电的三甲胺基团，具有亲水性和生物活性。通过与Cy5.5偶联，能够实现对胆碱相关分子过程的荧光可视化。

分子设计

胆碱结构小巧，带正电荷，直接偶联到Cy5.5有助于改善染料的水溶性。偶联通常通过胆碱的羟基与Cy5.5-NHS ester或Cy5.5-异硫氰酸酯等活性基团反应生成碳酸酯或氨基甲酸酯键。另一种方式是先将胆碱与琥珀酸酐反应，引入羧基后与Cy5.5-NHS偶联。

合成步骤

胆碱活化修饰

将胆碱溶于无水吡啶或DMF中，加入琥珀酸酐，在室温至40 ℃下反应，生成胆碱-琥珀酸酯。该步骤使胆碱分子引入羧基，便于与染料偶联。

粗产物经萃取与柱层析分离，得到带羧基的胆碱衍生物。

活泼酯制备

胆碱-琥珀酸酯在DMF中加入EDC·HCl与NHS，生成胆碱-NHS ester中间体。该中间体需在无水、惰性气氛下快速使用，以防止水解。

与CY5.5偶联

将CY5.5-amine或CY5.5-NH2溶于DMF，缓慢加入胆碱-NHS ester溶液，在碱性条件（DIPEA存在下）下搅拌反应12–24小时。

通过酰胺键或碳酸酯键实现共价结合，得到Cy5.5-choline。

纯化过程

反应混合物经旋蒸去溶剂后，残留物溶于甲醇/水溶液，进行除盐处理。

终产物通过制备型HPLC纯化，C18柱体系下以水/乙腈梯度洗脱。

CY5.5的近红外吸收（675 nm）可作为检测信号，收集纯产物组分，冻干得到深红色粉末。

表征

UV-Vis：显示典型CY5.5吸收峰（~675 nm）。

荧光光谱：激发在675 nm，发射在695–710 nm，与Cy5.5一致。

质谱：分子离子峰确认偶联产物分子量。

NMR：可见胆碱三甲胺信号与Cy5.5芳香信号，羟基质子消失，说明偶联成功。

HPLC：单峰表明纯度>95%。

总结

Cy5.5-Choline 的合成以胆碱的羟基为修饰位点，通过琥珀酸化引入连接臂，再与Cy5.5偶联。该探针结合了胆碱的生物特性和CY5.5的光学性能，纯化依赖于HPLC，表征可由光谱学与质谱确认。此类产物在构建荧光标记胆碱衍生物与探索胆碱代谢研究中具有重要意义。

产品名称：CY5.5-choline，花菁染料CY5.5标记胆碱

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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