CY5-Ficoll,花菁染料CY5标记右旋糖酐的合成过程
右旋糖酐(Ficoll)是一种高分子多糖,由蔗糖和环糊精或果糖的衍生物通过缩合形成的枝状多糖,分子量通常在 70–400 kDa 之间。由于其水溶性好、生物惰性和黏度特性,Ficoll 被应用于密度梯度离心和药物载体研究。通过将花菁染料 Cy5 共价偶联到 Ficoll 分子上(Cy5-Ficoll),可以获得荧光标记的高分子探针,用于细胞成像、分子追踪及生物相容性评估。其反应机理主要依赖羧基-胺偶联化学。
在合成过程中,Ficoll 分子上的羟基可以先通过改性引入氨基或羧基活化位点。常用方法是利用 1,1'-碳二亚胺(EDC)与 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)将 Ficoll 上的羧基活化为 NHS 酯,生成高度反应活性的中间体。随后,Cy5-NH2(伯胺或仲胺)通过亲核攻击 NHS 酯形成酰胺键,实现荧光染料的共价连接。这一过程为典型的 羧基活化-胺亲核偶联反应,具有选择性高、条件温和的特点。
在机理上,EDC 首先与 Ficoll 羧基反应生成 O-亚砜中间体,该中间体随后被 NHS 捕获形成稳定的 NHS 酯。在此过程中,羧基电子受体性质增强,酰化能力提高。随后 Cy5-NH2 的氨基以亲核方式攻击碳酰碳,形成稳定的酰胺键,同时释放 NHS。整个反应过程在缓冲体系(如 PBS 或碳酸盐缓冲液)中进行,pH 控制在 7–8 之间,以保证胺基活性和降低副反应发生率。
值得注意的是,Ficoll 本身分子量大、含羟基丰富,直接与 NHS 酯偶联效率较低,因此常通过部分羧基改性或交联剂引入反应位点来提高标记效率。同时,为避免 Cy5 光漂白,反应通常避光并在室温至轻微低温条件下进行。
反应完成后,通过透析、超滤或凝胶色谱可去除未反应的 Cy5,获得纯净 Cy5-Ficoll。产物可通过 UV-Vis 光谱(Cy5 特征吸收 640 nm)和荧光光谱(发射 670 nm)确认标记效果,同时质谱或 NMR 可辅助验证共价连接。
综上,Cy5-Ficoll 的标记反应机理基于 羧基活化-NHS 酯-胺亲核偶联,操作条件温和、选择性高,终得到的荧光标记多糖兼具 Ficoll 的生物惰性和 Cy5 的近红外荧光特性,可用于分子追踪、细胞膜通透性分析及生物相容性评估等多种实验。
产品名称:CY5-Ficoll,花菁染料CY5标记右旋糖酐
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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