Pacific Orange 琥珀酰亚胺酯的激发波长约405nm,发射波长约550nm
Pacific Orange是一种蓝橙荧光染料,激发波长约405 nm,发射波长约550 nm,可与生物分子中的伯胺(–NH₂)反应形成稳定酰胺键。Pacific Orange-NHS Ester是其活性衍生物,通常用于蛋白质、多肽或核酸标记。
其制备方法通常基于将Pacific Orange羧基化合物活化为NHS酯的策略。
2. 化学原理
羧基活化
Pacific Orange分子末端含羧基(–COOH)。
使用碳二亚胺类活化剂(如EDC或DCC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应。
生成Pacific Orange-NHS Ester,羧基被转化为活性NHS酯,易于与伯胺形成酰胺键。
反应机理
EDC或DCC活化羧基 → 形成O-酰基中间体。
O-酰基与NHS反应 → 生成NHS酯。
离去水分或副产物(如N,N'-二环己基脲),得到纯净的Pacific Orange-NHS Ester。
3. 典型制备步骤
反应溶剂
干燥有机溶剂,如DMF、DMSO或乙腈,避免水分引起NHS酯水解。
摩尔比
Pacific Orange:EDC:NHS通常为1:1.2:1.5,以确保羧基充分活化。
反应条件
温度:室温至25°C
时间:2–6小时,反应完成后监测薄层色谱(TLC)或HPLC。
纯化
可通过硅胶柱层析或反相HPLC去除未反应原料和副产物。
得到稳定的Pacific Orange-NHS Ester固体,可低温干燥保存。
4. 使用原则
溶解与标记
溶解于DMSO或DMF,避免直接水溶液以防水解。
与蛋白质、多肽或核酸中的伯胺反应,生成稳定酰胺键。
反应条件
pH 7–8的PBS或HEPES缓冲液为适宜。
避光操作,确保荧光染料稳定。
应用
蛋白质或抗体标记,用于免疫荧光、FACS分析、Western blot。
多肽标记和生物传感器制备。
5. 注意事项
避免长期水溶液反应,NHS酯易水解失活。
操作和保存需避光,低温干燥条件下稳定。
偶联产物需纯化,去除未反应游离染料,避免背景信号干扰。
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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