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iFluor 594 Styramide,iFluor 594 酪胺的合成步骤概述
发布时间:2025-10-14     作者:axc   分享到:

iFluor 594 Styramide,iFluor 594 酪胺的合成步骤概述

iFluor 594 Styramide 是由高性能荧光染料 iFluor 594 与酪胺(tyramine)偶联而成的荧光底物,光谱性质与 Alexa Fluor 594 接近,是一种发射在可见红光区的荧光探针。其典型激发峰约 590 nm,发射峰约 615–620 nm,亮度高、光稳定性强、抗漂白能力优于传统罗丹明类染料,并在中性至弱酸/弱碱条件下保持稳定信号。与 iFluor 488、647 等形成光谱区分,可用于多重标记。

酪胺(styramide,Tyramide)部分在过氧化物酶(HRP)催化下被氧化为自由基,该自由基可与蛋白质或组织中的酚基、酪氨酸残基共价结合,因此该分子是“酪胺信号放大(TSA)”技术的核心试剂之一。在免疫荧光、原位杂交 (ISH)、组织成像中能将信号灵敏度提升 10–100 倍,并实现高稳定性和低背景。

二、合成步骤概述(实验室级思路)

iFluor 594 Styramide 的合成主要分为两大部分:荧光染料母核的构建与修饰,以及酪胺的偶联反应。实际生产中可能已有 iFluor 594 活性酯或中间体,因此以下为常规化学路线的简化逻辑。

步骤 1:构建 iFluor 594 染料骨架

iFluor 594 属于改良罗丹明类或半菁(carbopyronine)类染料。通常从芳香胺/苯酚类起始物与酮或酯缩合生成二芳基酚酞内酯结构,再通过官能团引入调节电子性质,获得吸收/发射在 590 nm 左右的染料。随后将母核进行磺化或添加性侧链,提高水溶性及抗聚集性。

步骤 2:引入可偶联的活性位点

为了与酪胺形成稳定键,常在染料一端引入羧酸(–COOH)、活性酯(如 NHS-ester)、异硫氰酸酯(–NCS)或卤代活性位点。常用的是 NHS 酯,因为它能与伯胺快速形成酰胺键,且适用于水/有机共混体系。

常见方法:

通过氨基与琥珀酸酐反应引入 –COOH;

再用 EDC/NHS 或 DCC/NHS 活化生成 iFluor 594 NHS-ester。

步骤 3:酪胺的准备

酪胺(p-hydroxyphenethylamine)本身含有伯胺和酚羟基,其中伯胺为偶联位点,酚羟基为后续与靶标共价结合的活性位。因此在偶联阶段需保护酚羟基避免副反应(如使用 TBDMS 或 Bn 保护)。保护后保留伯胺以与染料反应。

步骤 4:偶联反应(关键步骤)

在无水 DMF 或 DMSO 中,将 iFluor 594 NHS-ester 与保护后的酪胺在温和碱(如 DIPEA 或 TEA)存在下搅拌,室温或略升温 1–4 h。

反应生成 iFluor 594–(酰胺)–酪胺中间体。

步骤 5:脱保护

若酚羟基被保护,需要通过酸(如 TFA)、氢解(Pd/C + H2)或氟化物(如 TBAF)去除保护基,恢复活性酪胺结构。

步骤 6:纯化

常用制备型 HPLC(反相 C18)、硅胶柱层析或离子交换柱去除未反应试剂、低分子杂质。对敏感染料需避光操作。

步骤 7:表征与确认

¹H NMR / ¹³C NMR 结构确认

MS MALDI/ESI 分析分子量

HPLC 纯度(>95%)

UV-Vis / Fluorescence 光谱测定吸收与发射峰

pH 稳定性、光稳定性评估

产品名称:iFluor 594 Styramide 

纯度:95%+

性状:固体或液体

储藏条件:-20°C干燥避光保存

包装规格:50mg  100mg  250mg  500mg(按需提供)

厂家:齐岳生物

iFluor 594 Styramide

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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